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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 17:13:54
对于我的四个酶来说，稳定。...

那用水来透析的效果不是一样的吗？我今天把水透析的过了道G25，没有盐峰，除盐效果挺好的。但是用水透析有沉淀，我用PBS透析之后没沉淀，但是透析后的纯度不好算，因为蛋白里有PBS，结果纯度只有40%。用水透析有78%。我们老师要我把总蛋白纯度达到95%，我觉得好难呀，这个问题一直很困扰我，您是做蛋白的高手，我在很多帖子看过您，这次有机会跟您交流，很荣幸，希望您能提出宝贵意见，非常感谢
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21楼2013-11-18 17:39:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
21楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-18 17:39:56
那用水来透析的效果不是一样的吗？我今天把水透析的过了道G25，没有盐峰，除盐效果挺好的。但是用水透析有沉淀，我用PBS透析之后没沉淀，但是透析后的纯度不好算，因为蛋白里有PBS，结果纯度只有40%。用水透析有78 ...

那你的蛋白质纯度是怎么算的？你之前说脱盐，现在说透析，到底是？？？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
22楼2013-11-18 19:46:43
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 19:46:43
那你的蛋白质纯度是怎么算的？你之前说脱盐，现在说透析，到底是？？？...

透析液冻干成蛋白粉里含有蛋白的量，透析也是可以除盐的，我们老师叫我还得除小分子，所以我就得再过一道G25
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23楼2013-11-21 08:42:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
23楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-21 08:42:52
透析液冻干成蛋白粉里含有蛋白的量，透析也是可以除盐的，我们老师叫我还得除小分子，所以我就得再过一道G25...

你冻干之前有没有确认蛋白质是单条带？还是说你的蛋白质溶液是含有很多种蛋白质的？
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24楼2013-11-21 15:23:23
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-21 15:23:23
你冻干之前有没有确认蛋白质是单条带？还是说你的蛋白质溶液是含有很多种蛋白质的？...

是总蛋白
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25楼2013-11-21 20:27:48
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
25楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-21 20:27:48
是总蛋白...

这我就不理解了，既然是总蛋白质，含有多种多样的蛋白质，或许就真有的蛋白质会损失掉。而且，如果你提取总蛋白质的方法造成蛋白质变性，那么结果就更难说了。如果有的蛋白质只保留一级结构，那就很可能溶解性很差，而且被脱盐柱的凝胶网络截住，又或者被超滤管的网络截住，损失就是必然了。
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26楼2013-11-21 21:33:33
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-21 21:33:33
这我就不理解了，既然是总蛋白质，含有多种多样的蛋白质，或许就真有的蛋白质会损失掉。而且，如果你提取总蛋白质的方法造成蛋白质变性，那么结果就更难说了。如果有的蛋白质只保留一级结构，那就很可能溶解性很差 ...

嗯，我的蛋白损失我已经预料到了，现在我又测到里面含糖了，有百分之7.6%，可能是糖蛋白了，所以我总蛋白的纯度要达到百分之九十五太难了
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27楼2013-11-22 18:20:32
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
27楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-22 18:20:32
嗯，我的蛋白损失我已经预料到了，现在我又测到里面含糖了，有百分之7.6%，可能是糖蛋白了，所以我总蛋白的纯度要达到百分之九十五太难了...

有糖蛋白是很正常的，但是如果把糖去除会影响蛋白质的活性。
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28楼2013-11-22 20:00:55
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-22 20:00:55
有糖蛋白是很正常的，但是如果把糖去除会影响蛋白质的活性。...

大侠，我现在真的很疑惑，做个总蛋白别人一直很质疑，纯度的问题，我用水透析损失量太大了，有沉淀，沉淀中还含蛋白，得到的蛋白量很少。用PBS透析的话，PBS又在里面，纯度又不好测，很疑惑。老师又说蛋白里可能还有二萜，所以我又想过道G25，但是过完G25又出现双峰的情况，就是盐峰下面出现蛋白峰，我的实验就卡那儿了，您是蛋白高手，能不能帮我一下，不甚感激。
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29楼2013-11-23 09:45:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
29楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-23 09:45:24
大侠，我现在真的很疑惑，做个总蛋白别人一直很质疑，纯度的问题，我用水透析损失量太大了，有沉淀，沉淀中还含蛋白，得到的蛋白量很少。用PBS透析的话，PBS又在里面，纯度又不好测，很疑惑。老师又说蛋白里可能还 ...

你是提取什么样品的总蛋白质？这个样品具体怎样得来？怎样提取的？
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30楼2013-11-23 14:54:19
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