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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 17:13:54
对于我的四个酶来说,稳定。...

那用水来透析的效果不是一样的吗?我今天把水透析的过了道G25,没有盐峰,除盐效果挺好的。但是用水透析有沉淀,我用PBS透析之后没沉淀,但是透析后的纯度不好算,因为蛋白里有PBS,结果纯度只有40%。用水透析有78%。我们老师要我把总蛋白纯度达到95%,我觉得好难呀,这个问题一直很困扰我,您是做蛋白的高手,我在很多帖子看过您,这次有机会跟您交流,很荣幸,希望您能提出宝贵意见,非常感谢
21楼2013-11-18 17:39:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
21楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-18 17:39:56
那用水来透析的效果不是一样的吗?我今天把水透析的过了道G25,没有盐峰,除盐效果挺好的。但是用水透析有沉淀,我用PBS透析之后没沉淀,但是透析后的纯度不好算,因为蛋白里有PBS,结果纯度只有40%。用水透析有78 ...

那你的蛋白质纯度是怎么算的?你之前说脱盐,现在说透析,到底是???
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
22楼2013-11-18 19:46:43
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 19:46:43
那你的蛋白质纯度是怎么算的?你之前说脱盐,现在说透析,到底是???...

透析液冻干成蛋白粉里含有蛋白的量,透析也是可以除盐的,我们老师叫我还得除小分子,所以我就得再过一道G25
23楼2013-11-21 08:42:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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23楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-21 08:42:52
透析液冻干成蛋白粉里含有蛋白的量,透析也是可以除盐的,我们老师叫我还得除小分子,所以我就得再过一道G25...

你冻干之前有没有确认蛋白质是单条带?还是说你的蛋白质溶液是含有很多种蛋白质的?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
24楼2013-11-21 15:23:23
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-21 15:23:23
你冻干之前有没有确认蛋白质是单条带?还是说你的蛋白质溶液是含有很多种蛋白质的?...

是总蛋白
25楼2013-11-21 20:27:48
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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25楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-21 20:27:48
是总蛋白...

这我就不理解了,既然是总蛋白质,含有多种多样的蛋白质,或许就真有的蛋白质会损失掉。而且,如果你提取总蛋白质的方法造成蛋白质变性,那么结果就更难说了。如果有的蛋白质只保留一级结构,那就很可能溶解性很差,而且被脱盐柱的凝胶网络截住,又或者被超滤管的网络截住,损失就是必然了。
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26楼2013-11-21 21:33:33
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

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26楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-21 21:33:33
这我就不理解了,既然是总蛋白质,含有多种多样的蛋白质,或许就真有的蛋白质会损失掉。而且,如果你提取总蛋白质的方法造成蛋白质变性,那么结果就更难说了。如果有的蛋白质只保留一级结构,那就很可能溶解性很差 ...

嗯,我的蛋白损失我已经预料到了,现在我又测到里面含糖了,有百分之7.6%,可能是糖蛋白了,所以我总蛋白的纯度要达到百分之九十五太难了
27楼2013-11-22 18:20:32
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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27楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-22 18:20:32
嗯,我的蛋白损失我已经预料到了,现在我又测到里面含糖了,有百分之7.6%,可能是糖蛋白了,所以我总蛋白的纯度要达到百分之九十五太难了...

有糖蛋白是很正常的,但是如果把糖去除会影响蛋白质的活性。
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28楼2013-11-22 20:00:55
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

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28楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-22 20:00:55
有糖蛋白是很正常的,但是如果把糖去除会影响蛋白质的活性。...

大侠,我现在真的很疑惑,做个总蛋白别人一直很质疑,纯度的问题,我用水透析损失量太大了,有沉淀,沉淀中还含蛋白,得到的蛋白量很少。用PBS透析的话,PBS又在里面,纯度又不好测,很疑惑。老师又说蛋白里可能还有二萜,所以我又想过道G25,但是过完G25又出现双峰的情况,就是盐峰下面出现蛋白峰,我的实验就卡那儿了,您是蛋白高手,能不能帮我一下,不甚感激。
29楼2013-11-23 09:45:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
29楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-23 09:45:24
大侠,我现在真的很疑惑,做个总蛋白别人一直很质疑,纯度的问题,我用水透析损失量太大了,有沉淀,沉淀中还含蛋白,得到的蛋白量很少。用PBS透析的话,PBS又在里面,纯度又不好测,很疑惑。老师又说蛋白里可能还 ...

你是提取什么样品的总蛋白质?这个样品具体怎样得来?怎样提取的?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
30楼2013-11-23 14:54:19
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