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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐，出来两个蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是应该一起下来吗？所谓“盐峰”是什么？我要的产物在第一个峰，第二个峰活性很低。另外，请问脱盐的时候，用什么尺寸的柱子为好？是细长一些的还是粗短一些的？26X20cm柱子怎么样？我样品一般有十几毫升。
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1楼 2012-03-05 15:46:49
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 17:13:54
对于我的四个酶来说，稳定。...

那用水来透析的效果不是一样的吗？我今天把水透析的过了道G25，没有盐峰，除盐效果挺好的。但是用水透析有沉淀，我用PBS透析之后没沉淀，但是透析后的纯度不好算，因为蛋白里有PBS，结果纯度只有40%。用水透析有78%。我们老师要我把总蛋白纯度达到95%，我觉得好难呀，这个问题一直很困扰我，您是做蛋白的高手，我在很多帖子看过您，这次有机会跟您交流，很荣幸，希望您能提出宝贵意见，非常感谢
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21楼2013-11-18 17:39:56
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baodongq

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 很专业！ 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:54:19
本帖内容被屏蔽
2楼2012-03-05 16:10:36
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baodongq

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-03-05 16:11:28
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by baodongq at 2012-03-05 16:10:36:
当采用凝胶过滤层析进行拖延的时候，你所用的缓冲液、柱子的长短和上样量对你的脱盐效果会有很大的影响。凝胶柱最好选择细长一点的（26X60），样品量不要高于10%且浓度要高点。
你在脱盐的时候出现的两个峰，可能 ...

谢谢你！我的样品缓冲液是磷酸缓冲液，洗脱缓冲液用的Tris-HCl。缓冲液在280nm应该没有吸收的呀。
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4楼2012-03-05 16:19:10
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