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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐,出来两个蛋白峰是怎么回事?所有的蛋白不是应该一起下来吗?所谓“盐峰”是什么?我要的产物在第一个峰,第二个峰活性很低。另外,请问脱盐的时候,用什么尺寸的柱子为好?是细长一些的还是粗短一些的?26X20cm柱子怎么样?我样品一般有十几毫升。
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-22 20:00:55
有糖蛋白是很正常的,但是如果把糖去除会影响蛋白质的活性。...

大侠,我现在真的很疑惑,做个总蛋白别人一直很质疑,纯度的问题,我用水透析损失量太大了,有沉淀,沉淀中还含蛋白,得到的蛋白量很少。用PBS透析的话,PBS又在里面,纯度又不好测,很疑惑。老师又说蛋白里可能还有二萜,所以我又想过道G25,但是过完G25又出现双峰的情况,就是盐峰下面出现蛋白峰,我的实验就卡那儿了,您是蛋白高手,能不能帮我一下,不甚感激。
29楼2013-11-23 09:45:24
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baodongq

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+3): 很专业! 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:54:19
本帖内容被屏蔽

2楼2012-03-05 16:10:36
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baodongq

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2012-03-05 16:11:28
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
: Originally posted by baodongq at 2012-03-05 16:10:36:
当采用凝胶过滤层析进行拖延的时候,你所用的缓冲液、柱子的长短和上样量对你的脱盐效果会有很大的影响。凝胶柱最好选择细长一点的(26X60),样品量不要高于10%且浓度要高点。
你在脱盐的时候出现的两个峰,可能 ...

谢谢你!我的样品缓冲液是磷酸缓冲液,洗脱缓冲液用的Tris-HCl。缓冲液在280nm应该没有吸收的呀。
4楼2012-03-05 16:19:10
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