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amq7392铁杆木虫 (著名写手)
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[求助]
关于脱盐柱的问题
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| 本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐，出来两个蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是应该一起下来吗？所谓“盐峰”是什么？我要的产物在第一个峰，第二个峰活性很低。另外，请问脱盐的时候，用什么尺寸的柱子为好？是细长一些的还是粗短一些的？26X20cm柱子怎么样？我样品一般有十几毫升。 |
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【答案】应助回帖
看天(BioEPI+1): 感谢热心交流 2012-03-09 16:21:24
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注意下面图片左上角的注释，cond=电导，cond%=电导率，这两个是表示盐的，A280是用于测定蛋白质的。每两条竖直的红线是每一次脱盐洗脱的循环，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA纯化仪，层析柱是GE的desalting，26/10，流速快10ml/min。 我用的样品是真菌固体培养物用超纯水浸泡，离心得到的粗酶液脱盐。从A280曲线来看，盐峰之后再次升高，说明粗酶液里也有很多分子量比蛋白质小的能引起A280吸收的物质。由于A280的原理是测定分子结构中有共轭双键构成大Ω键的物质，所以某些存在此结构的色素也能引起光吸收，而这部分洗脱液确实是有颜色的，所以可能是分子量较小的色素和其它非蛋白质的小分子物质，而不是蛋白质。因为脱盐柱是分子筛，分子尺寸大的蛋白质应该在盐之前就被洗脱出来，存在于第一个峰中。(怎么说我的图是广告呢，再发一次又能发上来的怎么可能是嘛)   |
15楼2012-03-09 03:14:19
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 很专业！ 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:54:19
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amisking(金币+3): 很专业！ 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:54:19
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2楼2012-03-05 16:10:36
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3楼2012-03-05 16:11:28
amq7392
铁杆木虫 (著名写手)
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4楼2012-03-05 16:19:10