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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达质粒测序
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li-spring

木虫 (著名写手)

[交流] 表达质粒测序

构建好的Pet30载体，都做了PCR验证，目的基因条带都有，但测序结果那个片段是载体上的序列，不知为什么？求解
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1楼 2012-03-04 15:59:39
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
li-spring(金币+1):谢谢参与
挑的菌是假阳性。
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2楼2012-03-04 19:59:04
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li-spring

木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-03-04 19:59:04:
挑的菌是假阳性。

假阳性 但做PCR验证又有条带呢？
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3楼2012-03-04 20:19:31
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li-spring

木虫 (著名写手)
但提取的质粒作PCR验证还是有目的条带啊
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4楼2012-03-04 20:20:02
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gaohuijy

银虫 (小有名气)
★
li-spring(金币+1):谢谢参与
可以先做一下双酶切，跑胶，然后再选择pET上的特定启动子开始测序。
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5楼2012-03-04 20:20:53
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dxzhaomiao

金虫 (正式写手)
★
li-spring(金币+1):谢谢参与
酶切验证一下。有时候PCR很难讲清怎么回事
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6楼2012-03-04 21:27:59
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
li-spring(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+1): 鼓励交流 2012-03-05 11:00:07
1.如上述，可再酶切验证一下；
2.测序有特定的载体引物，你应该看两个酶切位点之间的序列，两端的序列肯定是载体上的，你可以把目的序列与测得的序列比对下；
3.你也可以把你的两端引物给测序公司，让他用你的引物测；
4.也有可能是你在培养测序的菌时，被空载的菌体污染，空载的菌体与工程菌相比是有生长优势的。
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7楼2012-03-04 21:41:36
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
★
li-spring(金币+1):谢谢参与
不知楼主用什么引物做的PCR,可以用载体上引物做一下PCR，同样用你目的基因的引物做一下PCR，电泳，如果两次结果都有目的条带，则应该可说明是阳性了。不知对楼主有没有帮助
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8楼2012-03-04 22:55:01
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
★
li-spring(金币+1):谢谢参与
PCR验证本来就不准确，最好是用酶切鉴定。
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9楼2012-03-06 14:31:36
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