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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 实时定量PCR标准曲线

最近在做实时荧光定量PCR,做出来的标准曲线R2=0.992,但是计算的扩增效率很高,120%(90-105%正常),这样的标准曲线估计是不能用于下一步的计算中,想请问一下大虾们:扩增效率高的原因是什么??怎么避免过高的扩增效率??
接下来的实验是要重新设计引物吗?
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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yesucao: 金币+4, 有帮助 2012-04-01 21:24:37
yesucao: 金币+2, 有帮助 2012-04-02 12:08:00
yesucao: 金币+4, 有帮助 2012-04-06 12:08:59
扩增效率高,说明你体系里可能有目的基因的抑制剂。但我感觉多半是你基因本身的问题,你可以多做几次。其实扩增效率120%是可以接受的,系统误差的稍微变化都可能是这个结果,楼主不必担心
2楼2012-04-01 10:06:01
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