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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问用Vector NTI如何实现在pET28a中加入目的基因片段的谱图绘制。
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njyang2006

金虫 (正式写手)

[求助] 请问用Vector NTI如何实现在pET28a中加入目的基因片段的谱图绘制。

本人选用上游Nde I，下游Xho I酶切位点。
绘制谱图时发现pET28a的谱图中启动子和终止子的顺序刚好与实际的方向相反，请问这种情况下，如何把目的基因片段添加进去？
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寒亦乔51

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1楼2012-03-01 13:09:30
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3, BioEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-03-01 18:09:25
njyang2006(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-02 19:49:37
如果按照vector软件操作说明上一步一步来，先将片段酶切，再将载体酶切，再连接，这样软件会识别酶切位点处的粘性末端，方向软件会自动识别。（当然这样画图谱我觉得挺麻烦的）

我一般直接将载体两酶切位点间其他酶切位点序列删掉，然后将目的片段当序列插入到载体两酶切位点中（估计你也想这么干），然后将插入的序列add feature。遇到你这种启动子和终止子方向相反的情况，我先将目的基因reverse一下，然后同上面操作。这时候add feature时，在complementary前面打上勾，这样基因就和启动子方向保持一致了。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-03-01 14:06:04
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chuan2388

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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njyang2006(金币+3): ★★★很有帮助 2012-03-02 19:49:19
先将pET28a reverse,然后再插入基因序列
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把时间都浪费在自己身上吧！
9楼2012-03-02 17:34:56
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普通回帖

njyang2006

金虫 (正式写手)
自己顶一下，沉下去就没戏了
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2楼2012-03-01 13:42:38
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njyang2006

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-03-01 14:06:04:
如果按照vector软件操作说明上一步一步来，先将片段酶切，再将载体酶切，再连接，这样软件会识别酶切位点处的粘性末端，方向软件会自动识别。（当然这样画图谱我觉得挺麻烦的）

我一般直接将载体两酶切位点间其 ...

谢谢你的回复，不过按照你的这个操作了之后，片段的顺序仍旧是反的
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4楼2012-03-01 14:23:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
4楼: Originally posted by njyang2006 at 2012-03-01 14:23:31:
谢谢你的回复，不过按照你的这个操作了之后，片段的顺序仍旧是反的

你确定下，到底是基因箭头反了，还是基因序列反了。
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Thank-you，so-blue.
5楼2012-03-01 17:05:29
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jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我一般用别的软件例如dnastar之类把插入序列先做成反向互补的，然后跟3楼说的一样，在vectornti中直接插入就行了
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6楼2012-03-02 14:29:55
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njyang2006

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-03-01 17:05:29:
你确定下，到底是基因箭头反了，还是基因序列反了。

是pET28a的载体序列方向与基因的序列方向相反
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7楼2012-03-02 16:45:26
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
7楼: Originally posted by njyang2006 at 2012-03-02 16:45:26:
是pET28a的载体序列方向与基因的序列方向相反

插入之前先将目的基因reverse一下，
怎么会还相反呢？请问你确定你的基因reverse过了？
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Thank-you，so-blue.
8楼2012-03-02 16:47:25
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寒亦乔51

新虫 (小有名气)
送红花一朵
请问楼主问题解决了么，我用NTI根本不知道怎么插入序列啊  求指教
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10楼2016-03-18 11:36:49
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