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njyang2006金虫 (正式写手)
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请问用Vector NTI如何实现在pET28a中加入目的基因片段的谱图绘制。
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本人选用上游Nde I，下游Xho I酶切位点。 绘制谱图时发现pET28a的谱图中启动子和终止子的顺序刚好与实际的方向相反，请问这种情况下，如何把目的基因片段添加进去？  |
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susizheng
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如果按照vector软件操作说明上一步一步来，先将片段酶切，再将载体酶切，再连接，这样软件会识别酶切位点处的粘性末端，方向软件会自动识别。（当然这样画图谱我觉得挺麻烦的） 我一般直接将载体两酶切位点间其他酶切位点序列删掉，然后将目的片段当序列插入到载体两酶切位点中（估计你也想这么干），然后将插入的序列add feature。遇到你这种启动子和终止子方向相反的情况，我先将目的基因reverse一下，然后同上面操作。这时候add feature时，在complementary前面打上勾，这样基因就和启动子方向保持一致了。 |
3楼2012-03-01 14:06:04
susizheng
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