应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 正反向引物长度差别较大可用吗？
91/1返回列表
查看: 4135  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 正反向引物长度差别较大可用吗？

最近用primer premier 设计pcr引物，发现得分较高的几对引物正反向引物长度的差别都比较大，有的甚至能达到6个碱基，Tm值差别我控制在1度以内，请问这种引物是否可用？正反向引物之间的差别需要控制在几个碱基之内？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-01 13:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingke_s

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 恩，我也这么认为~~ 2012-03-01 14:12:51
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-01 17:06:37
内容已删除
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-01 13:10:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingke_s at 2012-03-01 13:10:09:
长度的差别觉得影响不是很大，关键是你设计的引物特异性好不好，有没有二聚体，有没有错配之类的；之前也p过两个引物长度差5、6个碱基的，反正是扩出来了。而且还有一点是这样，软件显示的Tm值和送过来的引物订单 ...

正解
回复此楼
3楼2012-03-01 21:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+4): 好的，但是特异性如何，是不是需要做切胶回收？？ 2012-03-02 16:32:41
我用过两个引物之间差了12个碱基，都没问题。因为两端引物是我师兄合成的，我做突变合成了中间引物，两端的我就没有重新合成了，所以第二步PCR时两个引物之间就差了很多，我的退火温度按照Tm值低的来调整，结果很好。
赞一下 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2012-03-01 22:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 谢谢帮助！！ 2012-03-02 19:44:56
不需要切胶回收，我的PCR产物从来没做过切胶回收，一直以来都是用产物纯化试剂盒的。特异性会有所降低，但是这个要根据你的引物来判断了……
赞一下 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
5楼2012-03-02 17:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chuan2388

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 好的，我试试看 2012-03-03 08:04:50
根据本人的多次实验验证，是可以的。
实验是做过了才知道，所以在不清楚的情况下，请大胆的尝试吧。
赞一下 回复此楼
把时间都浪费在自己身上吧！
6楼2012-03-03 00:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 那我就试一下哈 2012-03-03 14:32:57
放心吧，可用。引物长度不是引起PCR扩增的原因。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-03 09:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纸船

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 谢谢帮助！！ 2012-03-04 08:28:42
没问题的,我做过一次,两个引物差50多个碱基都可以。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-03 23:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
可用的，只要TM值不要差太多就可以了
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-04 15:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuyu_sdili 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +5 Doleres 2026-03-19 5/250 2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +17 不知道叫什么！ 2026-03-15 19/950 2026-03-19 15:06 by 尽舜尧1
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭