24小时热门版块排行榜    

查看: 3402  |  回复: 8

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 正反向引物长度差别较大可用吗?

最近用primer premier 设计pcr引物,发现得分较高的几对引物正反向引物长度的差别都比较大,有的甚至能达到6个碱基,Tm值差别我控制在1度以内,请问这种引物是否可用?正反向引物之间的差别需要控制在几个碱基之内??
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingke_s

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 恩,我也这么认为~~ 2012-03-01 14:12:51
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-01 17:06:37
长度的差别觉得影响不是很大,关键是你设计的引物特异性好不好,有没有二聚体,有没有错配之类的;之前也p过两个引物长度差5、6个碱基的,反正是扩出来了。而且还有一点是这样,软件显示的Tm值和送过来的引物订单上的Tm值还是有一定的差距的,尽量让Tm值差的不要太多,应该就可以。
2楼2012-03-01 13:10:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dingke_s at 2012-03-01 13:10:09:
长度的差别觉得影响不是很大,关键是你设计的引物特异性好不好,有没有二聚体,有没有错配之类的;之前也p过两个引物长度差5、6个碱基的,反正是扩出来了。而且还有一点是这样,软件显示的Tm值和送过来的引物订单 ...

正解
3楼2012-03-01 21:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+4): 好的,但是特异性如何,是不是需要做切胶回收?? 2012-03-02 16:32:41
我用过两个引物之间差了12个碱基,都没问题。因为两端引物是我师兄合成的,我做突变合成了中间引物,两端的我就没有重新合成了,所以第二步PCR时两个引物之间就差了很多,我的退火温度按照Tm值低的来调整,结果很好。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
4楼2012-03-01 22:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 谢谢帮助!! 2012-03-02 19:44:56
不需要切胶回收,我的PCR产物从来没做过切胶回收,一直以来都是用产物纯化试剂盒的。特异性会有所降低,但是这个要根据你的引物来判断了……
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
5楼2012-03-02 17:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chuan2388

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 好的,我试试看 2012-03-03 08:04:50
根据本人的多次实验验证,是可以的。
实验是做过了才知道,所以在不清楚的情况下,请大胆的尝试吧。
把时间都浪费在自己身上吧!
6楼2012-03-03 00:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 那我就试一下哈 2012-03-03 14:32:57
放心吧,可用。引物长度不是引起PCR扩增的原因。
7楼2012-03-03 09:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纸船

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 谢谢帮助!! 2012-03-04 08:28:42
没问题的,我做过一次,两个引物差50多个碱基都可以。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2012-03-03 23:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

可用的,只要TM值不要差太多就可以了
9楼2012-03-04 15:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuyu_sdili 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 希望今年自己国自然面上项目和老婆青年项目能中! +7 恐龙爸爸 2024-06-14 7/350 2024-06-16 14:48 by redfish105
[论文投稿] 编辑是什么意思 15+3 s090604054 2024-06-15 3/150 2024-06-16 10:29 by bobvan
[博后之家] 山东大学(青岛)“天然药物生物智造”课题组 招聘“博士后”(年薪20.4-55.6万元) +5 第二种态度 2024-06-11 8/400 2024-06-16 10:14 by 午睡未进行
[找工作] 成都产品质量检测研究院 200+3 鲸鱼663 2024-06-11 9/450 2024-06-16 10:08 by SNaiL1995
[有机交流] 车间生产,真空度很高,温度很高,但减压蒸馏速度很慢。 10+12 召唤鬼泣lL 2024-06-13 36/1800 2024-06-16 09:20 by ddc805
[硕博家园] 硕博巨婴,也许才刚刚开始 +30 SNaiL1995 2024-06-12 72/3600 2024-06-16 08:34 by 小龙虾biubiubiu
[考博] 34岁读博士晚吗 +26 emitdne 2024-06-13 26/1300 2024-06-16 07:16 by liyeqik
[论文投稿] 投稿被一个审稿人恶意评审了怎么样? +5 1chen 2024-06-14 7/350 2024-06-15 23:15 by xy66xy
[教师之家] 关于2023的收入 +33 小龙虾2008 2024-06-10 34/1700 2024-06-15 23:01 by zeolitess
[基金申请] 关于博后基金的bug问题 +6 lxr1991 2024-06-14 9/450 2024-06-15 21:17 by since—2010
[硕博家园] 博士毕业高校和就业的相关问题 +4 SCITOPPP 2024-06-14 6/300 2024-06-15 18:54 by SCITOPPP
[基金申请] 博后基金,以往的结果点不开,怎么回事呢?最后一次机会了,两次都没中前面。 +7 kyukitu 2024-06-14 13/650 2024-06-15 06:46 by 我是王小帅
[论文投稿] 审稿问题:为什么荧光激发波长和紫外吸收波长差的大? 10+4 sdawege 2024-06-14 8/400 2024-06-14 22:39 by 东北读书人
[基金申请] 工材E口JQ有消息了吗 +4 babyduck 2024-06-11 4/200 2024-06-14 17:23 by firepick
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[论文投稿] ACS Nano投稿后分配到副编辑手里12天了,能确定送审了吗? +5 潇洒怡惜 2024-06-12 10/500 2024-06-14 09:56 by 潇洒怡惜
[论文投稿] 文章proof要求使用机构的邮箱 5+3 不可不信缘 2024-06-11 11/550 2024-06-14 07:00 by 3001160025
[硕博家园] 机械研究生如何拿到年薪40+w +13 阿巴阿巴哦哦 2024-06-11 15/750 2024-06-13 15:40 by 113745685
[论文投稿] with editor日期变更 +3 慎独的小花卷 2024-06-12 8/400 2024-06-13 11:00 by 慎独的小花卷
[论文投稿] 摩擦磨损论文投稿 +3 jmysan 2024-06-12 3/150 2024-06-13 08:36 by 莱茵润色
信息提示
请填处理意见