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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么最近做连接转化总是失败
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么最近做连接转化总是失败

本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做连接转化，感受态用过自己做的和别人做的都不长菌落，也用过买的感受态，只长了不到10个菌落挑单克隆后做菌液PCR检测发现都是空载，请问是什么原因？请各位高手指教一下！！谢啦！（我的回收产物大小在600~700bp之间，回收产物4ul，载体1ul，SolutionI 5ul，16°C连接1h）
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1楼 2012-02-24 13:36:21
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-27 10:50:45
这个原因我还真晓得，我遇见过，本人觉得首先是你回收的片段太小，还有再加上另外一种可能回收条带亮度不太行，接着用快连时间太短，导致效率不是很好，建议，回收片段亮度要提高，其次可以用慢连，放在室温16度，过夜，然后明天会出现很多单菌落（前提是体系要对）。
要多给点金币啊
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体会生活
14楼2012-02-27 00:16:40
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