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Immunofluorescence assays. For MDV immunofluorescence assays, CEFs were plated on poly-L-lysine coated 12 mm diameter glass dishes (12-well plates) at 8 · 104 cells well/ml density in 10% FCS medium. The following day, medium was removed and MDV was inoculated at m.o.i. of 1 PFU/cell, in 2% FCS MEM, in the presence and absence of proteins. After 5 h of incubation at 37 C in 5%CO2, monolayers were washed twice with PBS and then fixed with 4% p-formaldehyde in PBS for 30 min at room temperature. After washing twice more, 0.1M glycine was added to neutralize eventual residual traces of fixative. Fixed cells were left overnight at 4 C in PBS. For intracellular detection of MDV-specific signals by fluorescence microscopy, cells were permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 5 min to allow antibodies to enter the cytoplasm and interact with viral antigens. Fluorescein conjugated (FITC) anti-MDV chicken antibody was purchased from Eurobio (France). |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】应助回帖
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小丹木木(金币+3, MolEPI+1): 很热心哦 2012-02-28 16:32:46
释梦110(金币+20): ★有帮助 虽然我已经翻译出来了，但还是非常非常的感谢！ 2012-02-29 12:52:18
小丹木木(金币+3, MolEPI+1): 很热心哦 2012-02-28 16:32:46
释梦110(金币+20): ★有帮助 虽然我已经翻译出来了，但还是非常非常的感谢！ 2012-02-29 12:52:18
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免疫荧光检测 MDV免疫荧光检测，以8 · 104 cells well/ml的密度接种CEFs（应该是细胞系）于L-多聚赖氨酸包被过得直径12mm的培养皿中（12孔板），含有10%的胎牛血清培养基。第二天，移除培养基，MDV以m.o.i. of 1 PFU/cell接种，含有2%胎牛血清的培养基，有或者无蛋白质的存在（应该是两组）。37度5%CO2孵箱孵育5小时，PBS洗两次，4%多聚甲醛室温固定30分钟，加入0.1M的甘氨酸中和残留的固定剂。固定好的细胞置于PBS中，4度过夜。荧光显微镜检测细胞内MDV特异性信号，0.1% Triton X-100 渗透化处理细胞，使抗体更易进入细胞质和抗原结合。荧光共轭（FITC标记）抗MDV的鸡抗体购自Eurobio（法国）。 |
2楼2012-02-28 12:21:42
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