| 查看: 4223 | 回复: 11 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
joyjane88铜虫 (初入文坛)
|
[交流]
PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取） 已有8人参与
|
|||
| 大家好，近期构建一载体，但所用出发载体质粒是低拷贝的（约20个copies），但不是很大（5-6K）。每次用小提试剂盒提取得到的样品量很低（10-20ng/ul），很不利于后期的酶切连接及转化。本人想通过pcr的方法扩增来制备这个质粒（制备量应该可以达到50ng/ul以上，而且可以扩增好多管），但没有查到相关的方法（有用PCR扩增制备定点突变质粒的，但没有看到制备常规质粒的PCR）。想问问大家可行吗？欢迎大家给出宝贵意见。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞信号转导 |
» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 全质粒PCR引物设计
已经有9人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 怎么区分质粒是低拷贝还是高拷贝
已经有13人回复
- 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
已经有27人回复
- 【求助/交流】质粒PCR产物的回收（质粒构建）
已经有11人回复
- 【求助/交流】做过大引物全质粒PCR的进来看
已经有29人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！
已经有11人回复
joyjane88
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 142.7
- 散金: 3
- 帖子: 43
- 在线: 20.4小时
- 虫号: 1183633
- 注册: 2011-01-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
送鲜花一朵 4楼2012-02-22 16:25:01
liuyu_sdili
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 3045.9
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 394
- 在线: 311.7小时
- 虫号: 1130112
- 注册: 2010-10-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-02-22 14:51:48
quiller2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 160 (高中生)
- 贵宾: 0.114
- 金币: 2752.9
- 散金: 50
- 红花: 26
- 帖子: 1168
- 在线: 167.3小时
- 虫号: 895537
- 注册: 2009-11-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+5): 鼓励积极应助！ 2012-02-22 20:43:19
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+5): 鼓励积极应助！ 2012-02-22 20:43:19
|
问题是你的引物啊！我们通常的引物的末端都是-OH，在体外可不好直接形成磷酸二酯键呢！而做磷酸化我不知道会不会两端都磷酸化了！ 而site-direction kit最后是通过细胞来扩增的；，单链进入细胞后再复制生成的。因此，你还是要好好考虑一下！ PS，20 copie还是很多的，增加一下细胞的量应该是没有问题的，做克隆神马的还是很容易的，除非你要去转染细胞什么的，那到是一个体力活儿，呵呵！ Good luck! |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2012-02-22 15:55:40
joyjane88
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 142.7
- 散金: 3
- 帖子: 43
- 在线: 20.4小时
- 虫号: 1183633
- 注册: 2011-01-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-02-22 16:26:35
20