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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取）
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joyjane88

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取）已有8人参与

大家好，近期构建一载体，但所用出发载体质粒是低拷贝的（约20个copies），但不是很大（5-6K）。每次用小提试剂盒提取得到的样品量很低（10-20ng/ul），很不利于后期的酶切连接及转化。本人想通过pcr的方法扩增来制备这个质粒（制备量应该可以达到50ng/ul以上，而且可以扩增好多管），但没有查到相关的方法（有用PCR扩增制备定点突变质粒的，但没有看到制备常规质粒的PCR）。想问问大家可行吗？欢迎大家给出宝贵意见。
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1楼2012-02-22 11:59:51
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+4): 鼓励积极应助！ 2012-02-22 20:43:13
楼主用的应该是在大肠杆菌里面的穿梭质粒吧？质粒用的什么复制起始位点？如果是跟pBR322一样的话，可以用氯霉素扩增的办法增加质粒拷贝~~~
如果不这样的话，也可以做质粒中提，方法试剂分子克隆上有的~~~
至于你的方法，我还没听说。。。。。。。
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2楼2012-02-22 14:51:48
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以的达到上千吧，相关信息详细看一下分子克隆中文第三版上册第十五页~~~
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9楼2012-02-22 22:02:41
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