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zhjzhou木虫 (著名写手)
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基因克隆中酶切连接问题
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| 各位大侠好，我克隆一个2000bp左右的基因，一开始设计的引物没有加酶切位点，PCR产物直接连接到T-vector中，已经测序和我的目的基因完全吻合。于是又重新设计加上酶切位点的引物，从质粒上PCR，这样PCR产物纯化后可以直接连接到我要克隆的载体中，不需要酶切吧。我是这样做的，现在遇到问题了，我连接的产物转化老是长不出来。请各位指点下，我PCR产物和载体都需要酶切，再进行连接吗？我以前PCR产物没有酶切直接连接都可以的，现在不知道是怎么回事情了 |
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