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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于TAKARA的Ex Taq 酶~
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沾欢欢

金虫 (正式写手)

啦啦啦

[求助] 关于TAKARA的Ex Taq 酶~

TAKARA的Ex Taq 酶比较适合长片段的模板吗?
我用其做普通PCR,模板长度200 bp左右,扩增出来的结果很奇怪,对照组除了有引物二聚体的条带,也会有大于200bp的条带,有谁知道的,麻烦告诉我,谢谢了~~
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1楼 2012-02-17 10:20:44
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amilie030312

金虫 (正式写手)
小丹木木(金币+2): 有道理呵 2012-02-17 13:47:22
200bp的片段应该是是个正常的酶都能扩出来的，如果引物没问题，看看是不是GC含量高，那就需要用耐受高GC的酶来扩，如果都没有这些问题就是再普通不过得酶还200就扩不出来，那就赶紧把Takara酶扔了吧。
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2楼2012-02-17 12:46:19
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shicaozhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-17 13:46:52
以前用这个酶还挺好用的，有其他的杂条带可能是你的水或者PCR管或者枪头有污染。还有就是你的引物可能不对，需要再优化一下。
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3楼2012-02-17 13:03:50
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outlooker09

金虫 (小有名气)
也可能是引物及蛋白浓度比例不合适
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杨柳岸
4楼2012-02-17 17:48:24
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2012-02-18 22:44:52
建议楼主先检查一下引物和模板之间的互补情况。
如果是对照组和你的实验组都有非目标条带，可能是引物和模板之间有别的互补区域，产生非特异条带。
如果只是对照组有杂带，那就是有污染了，更换PCR管，枪头和PCR水再看看。
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5楼2012-02-18 22:42:56
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-29 17:16:08
有以下几种可能
1.对照组有污染，把水换掉再试试
2.引物设计有问题，不知道你是什么引物，是特异性还是兼并性的，兼并性引物非常有可能引起单引物扩增
3.EX TAQ酶很好用的，我们实验室一直用这个，大小片段都可以做。
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6楼2012-02-29 16:23:44
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是你做实验过程中将PCR试剂污染了.....
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7楼2012-02-29 16:27:26
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