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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见
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pplu0329

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中，摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中，摇2h后加入IPTG诱导表达4h，收菌跑胶，可是泳道上连菌体蛋白都看不见？请教下是什么情况？
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1楼 2012-02-14 11:15:05
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pplu0329

木虫 (正式写手)
回答前辈的问题，我在收取菌液样本后，按照实验步骤在1ml样本离心沉淀中加入50ul纯水和50ul2*buffer，煮蛋白5分钟，10ul上样跑胶的，其中有个问题就是在溶解沉淀的时候液体很粘稠，我吸取样品的时候可能没有在粘稠的位置吸取，一方面是不是就是没有吸到有蛋白的地方，另一方面是不是我已经让蛋白变性了？不能煮，直接上样么？请指教。
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8楼2012-02-18 23:09:24
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是噬菌体的原因啊
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2楼2012-02-14 13:26:14
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pplu0329

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-14 13:26:14:
是不是噬菌体的原因啊

请教前辈，我是第一次做这个，其中氨苄及氯霉素均按照比例加入，您说的噬菌体又是什么情况呢？
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3楼2012-02-15 23:17:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

pplu0329(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-16 19:28:38
噬菌体就是专门吃细菌的，具体怎么消除我也不知道，可能百度里有吧
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4楼2012-02-16 08:30:31
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