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pplu0329

木虫 (正式写手)

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在线: 154.2小时
虫号: 687898
注册: 2009-01-05
专业: 肾衰竭

[求助] 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中，摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中，摇2h后加入IPTG诱导表达4h，收菌跑胶，可是泳道上连菌体蛋白都看不见？请教下是什么情况？

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1楼2012-02-14 11:15:05

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pplu0329

木虫 (正式写手)

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回答前辈的问题，我在收取菌液样本后，按照实验步骤在1ml样本离心沉淀中加入50ul纯水和50ul2*buffer，煮蛋白5分钟，10ul上样跑胶的，其中有个问题就是在溶解沉淀的时候液体很粘稠，我吸取样品的时候可能没有在粘稠的位置吸取，一方面是不是就是没有吸到有蛋白的地方，另一方面是不是我已经让蛋白变性了？不能煮，直接上样么？请指教。