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pplu0329

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2631.8
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红花: 1
帖子: 636
在线: 154.2小时
虫号: 687898
注册: 2009-01-05
专业: 肾衰竭

[求助] 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中，摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中，摇2h后加入IPTG诱导表达4h，收菌跑胶，可是泳道上连菌体蛋白都看不见？请教下是什么情况？

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1楼2012-02-14 11:15:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)

BioEPI: 1
应助: 46 (小学生)
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散金: 140
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在线: 43.8小时
虫号: 707846
注册: 2009-02-24
专业: 蛋白质组学

★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2012-03-01 15:26:11

引用回帖:

6楼: Originally posted by pplu0329 at 2012-02-17 22:30:36:
1.加入IPTG4H后菌液是浑浊的。
2.我的目的蛋白之前请老师做的时候都是很成熟的了
3.确定是有这两种抗性的
谢谢这位前辈的意见，您看我这样应该怎么调整？另，能否推荐一些入门的蛋白表达纯化和抗体制备的书？

如果是之前已经做出来蛋白过,那这次跑胶连菌体蛋白都没有可能是你上样量不够吧?另外菌体上样前做过什么处理么?没有让蛋白变性沉淀吧?要是蛋白被加热或者其它操作给弄变性了沉淀了,你加入上清上样什么都没有的.蛋白表达的相关内容你网上搜搜看就行了,好象有本<抗体制备与使用实验指南>,你可以看看.