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pplu0329

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达不明确,但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中,摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中,摇2h后加入IPTG诱导表达4h,收菌跑胶,可是泳道上连菌体蛋白都看不见?请教下是什么情况?
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若水5886

新虫 (小有名气)

★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2012-03-01 15:26:11
引用回帖:
6楼: Originally posted by pplu0329 at 2012-02-17 22:30:36:
1.加入IPTG4H后菌液是浑浊的。
2.我的目的蛋白之前请老师做的时候都是很成熟的了
3.确定是有这两种抗性的
谢谢这位前辈的意见,您看我这样应该怎么调整?另,能否推荐一些入门的蛋白表达纯化和抗体制备的书?

如果是之前已经做出来蛋白过,那这次跑胶连菌体蛋白都没有可能是你上样量不够吧?另外菌体上样前做过什么处理么?没有让蛋白变性沉淀吧?要是蛋白被加热或者其它操作给弄变性了沉淀了,你加入上清上样什么都没有的.蛋白表达的相关内容你网上搜搜看就行了,好象有本<抗体制备与使用实验指南>,你可以看看.
7楼2012-02-18 15:42:41
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是噬菌体的原因啊
2楼2012-02-14 13:26:14
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pplu0329

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-14 13:26:14:
是不是噬菌体的原因啊

请教前辈,我是第一次做这个,其中氨苄及氯霉素均按照比例加入,您说的噬菌体又是什么情况呢?
3楼2012-02-15 23:17:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

pplu0329(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-16 19:28:38
噬菌体就是专门吃细菌的,具体怎么消除我也不知道,可能百度里有吧
4楼2012-02-16 08:30:31
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