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pplu0329

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达不明确,但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中,摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中,摇2h后加入IPTG诱导表达4h,收菌跑胶,可是泳道上连菌体蛋白都看不见?请教下是什么情况?
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励回答 2012-03-01 15:25:59
1. 加入IPTG诱导表达4h后菌液是比较澄清的还是很浑浊了?有的菌长的比较慢,量少的话可能检测不出来,特别是当你用低灵敏度的染胶溶液。
2. 目的蛋白表达不是随便找个菌就可以诱导表达的,因为有的目的蛋白具有毒性,需要选择合适的宿主进行表达。
3. 你选择的宿主菌确定具有氨苄及氯霉素抗性么?
5楼2012-02-17 11:22:54
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是噬菌体的原因啊
2楼2012-02-14 13:26:14
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pplu0329

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-14 13:26:14:
是不是噬菌体的原因啊

请教前辈,我是第一次做这个,其中氨苄及氯霉素均按照比例加入,您说的噬菌体又是什么情况呢?
3楼2012-02-15 23:17:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

pplu0329(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-16 19:28:38
噬菌体就是专门吃细菌的,具体怎么消除我也不知道,可能百度里有吧
4楼2012-02-16 08:30:31
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