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pplu0329

木虫 (正式写手)

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[求助] 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中，摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中，摇2h后加入IPTG诱导表达4h，收菌跑胶，可是泳道上连菌体蛋白都看不见？请教下是什么情况？

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1楼 2012-02-14 11:15:05

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若水5886

新虫 (小有名气)

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专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

引用回帖:

8楼: Originally posted by pplu0329 at 2012-02-18 23:09:24:
回答前辈的问题，我在收取菌液样本后，按照实验步骤在1ml样本离心沉淀中加入50ul纯水和50ul2*buffer，煮蛋白5分钟，10ul上样跑胶的，其中有个问题就是在溶解沉淀的时候液体很粘稠，我吸取样品的时候可能没有在粘稠 ...

粘稠是因为你直接煮菌液让里面的核酸都跑出来了，可以加点核酸降解酶作用一段时间就看见变得清澈透亮了。建议你跑胶的时候即使是随便看看也要加marker，如果marker有条带而菌液没有条带，那可能是上样蛋白量不够或者是之前操作有问题；如果连marker也没有条带那就可能是胶的问题了吧