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汕头大学海洋科学接受调剂
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pplu0329

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达不明确,但是连菌体蛋白都不见

我用50ul菌液加入5mlLB培养基中,摇菌扩增16h后按2%比例转接到200mlLB培养基中,摇2h后加入IPTG诱导表达4h,收菌跑胶,可是泳道上连菌体蛋白都看不见?请教下是什么情况?
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by pplu0329 at 2012-02-18 23:09:24:
回答前辈的问题,我在收取菌液样本后,按照实验步骤在1ml样本离心沉淀中加入50ul纯水和50ul2*buffer,煮蛋白5分钟,10ul上样跑胶的,其中有个问题就是在溶解沉淀的时候液体很粘稠,我吸取样品的时候可能没有在粘稠 ...

粘稠是因为你直接煮菌液让里面的核酸都跑出来了,可以加点核酸降解酶作用一段时间就看见变得清澈透亮了。建议你跑胶的时候即使是随便看看也要加marker,如果marker有条带而菌液没有条带,那可能是上样蛋白量不够或者是之前操作有问题;如果连marker也没有条带那就可能是胶的问题了吧
10楼2012-03-01 16:07:09
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是噬菌体的原因啊
2楼2012-02-14 13:26:14
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pplu0329

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-14 13:26:14:
是不是噬菌体的原因啊

请教前辈,我是第一次做这个,其中氨苄及氯霉素均按照比例加入,您说的噬菌体又是什么情况呢?
3楼2012-02-15 23:17:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

pplu0329(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-16 19:28:38
噬菌体就是专门吃细菌的,具体怎么消除我也不知道,可能百度里有吧
4楼2012-02-16 08:30:31
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