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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题

需要将Ti质粒pMD18-T同PBI121转入到同一农杆菌菌株中，前者为Amp抗性，后者为Kan抗性，农杆菌为LBA4404，可以通过制备感受态分别将两者转入到不同的菌株中，却不能转入到同一菌株中，请教原因！！！！谢谢啦！！
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1楼 2012-02-13 14:34:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蝶舞清池(金币+10): ★★★很有帮助 2012-03-11 18:53:25
SongQ5285(金币+5): 鼓励积极应助 2012-03-14 13:12:11
pMD18-T上是否连有你想转化到植物中的基因啊，根据我的文献调研，应该先将这个基因克隆到pbi121上，然后将这个构建好的pbi121质粒转入农杆菌中，用这样的农杆菌侵染植物。不能将两个质粒同时导入农杆菌中，指望它自己重组。。。。。。
我也刚做农杆菌的转化，不对之处请指正。
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但愿快乐不停歇，悲伤不再来~
8楼2012-03-11 18:33:15
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普通回帖

fzh3848107

金虫 (著名写手)
支持一下
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要站着,不要总是站着 完全可以让任何人在任何特定时间内适当地明白任何事情
2楼2012-02-13 21:33:43
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pMD18-T 不是Ti质粒啊，转入农杆菌里干什么呢？
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蝶舞清池
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
3楼2012-02-14 08:05:53
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chasetju

新虫 (小有名气)
LBA4404自己带有一个辅助质粒，叫做Helper，他本身是一个Ti质粒，一般来说你只须把你的植物表达载体或者叫双元载体（你的pBI121）电击转化进去就可以用于植物转基因 。
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蝶舞清池
4楼2012-02-15 01:17:47
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by fzh3848107 at 2012-02-13 21:33:43:
支持一下

谢谢！
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5楼2012-02-15 14:04:46
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 香菱儿 at 2012-02-14 08:05:53:
pMD18-T 不是Ti质粒啊，转入农杆菌里干什么呢？

哦，如果不是Ti质粒，就不能用农杆菌将其中的目的基因转入到植物中了么？
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6楼2012-02-15 14:10:00
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by chasetju at 2012-02-15 01:17:47:
LBA4404自己带有一个辅助质粒，叫做Helper，他本身是一个Ti质粒，一般来说你只须把你的植物表达载体或者叫双元载体（你的pBI121）电击转化进去就可以用于植物转基因 。

那这个表达载体就不用必须是Ti质粒了吧？
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7楼2012-02-15 14:11:37
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by pushizi at 2012-03-11 18:33:15:
pMD18-T上是否连有你想转化到植物中的基因啊，根据我的文献调研，应该先将这个基因克隆到pbi121上，然后将这个构建好的pbi121质粒转入农杆菌中，用这样的农杆菌侵染植物。不能将两个质粒同时导入农杆菌中，指望它 ...

哦，以前思路错了，谢谢！
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9楼2012-03-11 18:52:00
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bbzj

新虫 (小有名气)
我觉得应该要重新将目的片断重构成一个质粒,然后再转入LBA4404中..这样的表达载体会好一些吧.
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10楼2012-03-14 11:28:38
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