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成龙平

新虫 (初入文坛)

[求助] pet-24a 原核表达

我在pET-24a上连了一基因,做了原核表达后(37℃,16℃都做了),没有表达出来(与对照的一样,没有条带)。请问各位,这是什么原因啊?
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

你怎么坐的,详细点讲一下,不然别人不好分析啊。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2012-01-14 15:49:33
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海阔天空8158

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+1): 说的非常对 2012-01-14 17:28:53
同意楼上的。这需要楼主提供很多细节,不然没有正对性。
而且,还要保证各项试剂的都是没有任何问题的,楼主的操作也没有任何失误,条件也进行了优化。有时候,可能有很低的表达量,只是没有检测到而已。
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
3楼2012-01-14 17:27:45
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
IPTG浓度?蛋白亲疏水性?跨膜情况?
jiayoubashaonian
4楼2012-01-14 17:31:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不能表达不仅仅和温度有关系,和你要表达的蛋白的性质,比如毒性、密码子偏爱性、ORF等都有关系的。
5楼2012-01-14 21:42:59
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个你得说的详细点,不然不好帮你 分析啊。
首先你至少要q确定你的基因已经正确表达,通过测序证明序列没有发生太多突变,表达时没有发生移码突变等等。
其次,表达过程的温度,pH,诱导浓度,时间等等条件是否合适,都是需要考虑的因素。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
6楼2012-01-15 20:13:12
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