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成龙平

新虫 (初入文坛)

[求助] pet-24a 原核表达

我在pET-24a上连了一基因，做了原核表达后（37℃，16℃都做了），没有表达出来（与对照的一样，没有条带）。请问各位，这是什么原因啊？
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1楼 2012-01-14 14:54:27
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
你怎么坐的，详细点讲一下，不然别人不好分析啊。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2012-01-14 15:49:33
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海阔天空8158

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 说的非常对 2012-01-14 17:28:53
同意楼上的。这需要楼主提供很多细节，不然没有正对性。
而且，还要保证各项试剂的都是没有任何问题的，楼主的操作也没有任何失误，条件也进行了优化。有时候，可能有很低的表达量，只是没有检测到而已。
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
3楼2012-01-14 17:27:45
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
IPTG浓度？蛋白亲疏水性？跨膜情况？
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jiayoubashaonian
4楼2012-01-14 17:31:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不能表达不仅仅和温度有关系，和你要表达的蛋白的性质，比如毒性、密码子偏爱性、ORF等都有关系的。
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5楼2012-01-14 21:42:59
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个你得说的详细点，不然不好帮你 分析啊。
首先你至少要q确定你的基因已经正确表达，通过测序证明序列没有发生太多突变，表达时没有发生移码突变等等。
其次，表达过程的温度，pH，诱导浓度，时间等等条件是否合适，都是需要考虑的因素。
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
6楼2012-01-15 20:13:12
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