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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA cloning问题
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lingxingcao

新虫 (小有名气)

[求助] TA cloning问题

一个800bp左右的目的基因做TA克隆做了半年了，还没做出了，求问到底是怎么回事啊？目的基因PCR产物有非特异性条带，故做了胶回收纯化产物，担心A尾巴脱掉，又将纯化的产物做了加尾反应，然后做TA克隆（1ulT载体，7ul目的基因，1ul buffer, 1ul 酶）。求高手指点。
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1楼 2011-12-24 16:11:21
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:11:53
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:12:09
直接用peasy T1 simple试一下吧？半年也太长了点。。。。。
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jiayoubashaonian
2楼2011-12-24 16:52:01
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lingxingcao(金币+2): 谢谢哦 2011-12-25 10:07:48
有了特异PCR产物做TA克隆应该说很简单的
我们Taq酶做的PCR产物切胶回收后直接就做TA克隆，成功率挺高的。
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3楼2011-12-24 21:02:18
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既然能扩出来那就应该很好连的，半年未免有点夸张了吧，建议胶回收后直接连T。
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
4楼2011-12-25 13:39:07
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geduo42

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2011-12-26 15:37:14
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