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TA cloning问题
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lingxingcao
新虫
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虫号: 873406
注册: 2009-10-15
专业: 生物化学
[
求助
]
TA cloning问题
一个800bp左右的目的基因做TA克隆做了半年了,还没做出了,求问到底是怎么回事啊?目的基因PCR产物有非特异性条带,故做了胶回收纯化产物,担心A尾巴脱掉,又将纯化的产物做了加尾反应,然后做TA克隆(1ulT载体,7ul目的基因,1ul buffer, 1ul 酶)。求高手指点。
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1楼
2011-12-24 16:11:21
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heroyl
木虫
(正式写手)
应助: 19
(小学生)
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帖子: 465
在线: 141小时
虫号: 1122022
注册: 2010-10-14
性别:
MM
专业: 动物遗传学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
既然能扩出来那就应该很好连的,半年未免有点夸张了吧,建议胶回收后直接连T。
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实验虐我千百遍,我待实验如初恋
4楼
2011-12-25 13:39:07
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blackrose8089
铁杆木虫
(职业作家)
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散金: 155
红花: 30
沙发: 6
帖子: 3702
在线: 790.1小时
虫号: 614948
注册: 2008-09-28
专业: 植物学研究的新技术、新方
★ ★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:11:53
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:12:09
直接用peasy T1 simple试一下吧?半年也太长了点。。。。。
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jiayoubashaonian
2楼
2011-12-24 16:52:01
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lxj341401
至尊木虫
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
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lingxingcao(金币+2): 谢谢哦 2011-12-25 10:07:48
有了特异PCR产物做TA克隆应该说很简单的
我们Taq酶做的PCR产物切胶回收后直接就做TA克隆,成功率挺高的。
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3楼
2011-12-24 21:02:18
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geduo42
禁虫
(初入文坛)
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5楼
2011-12-26 15:37:14
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