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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 1259100
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性别: MM
专业: 动物遗传学

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数，需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做，建议用探针法做。现在毫无头绪，不知道怎么设计，怎么合成？望各位高人指点一下……

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1楼 2011-12-22 16:26:31

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sandisk411

新虫 (小有名气)

MolEPI: 1
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-24 15:28:26

TaqMAN法和SYB法都可以用于检测拷贝数，关键是你能不能设计出合适的探针。用RT-PCR法鉴定拷贝数需要你对材料非常了解，比如是转基因T0代，如果是单拷贝的，插入目的基因与参考基因（基因组里单拷贝）的比值应是1:2；双拷贝的，就该是1:1；如果T1代，RT-PCR用于单株分析时，情况会很复杂，可以说你将无法准确判断，除非你已知是纯合的单株。
对于遗传背景不清楚的，你最好用SOURTHERN杂交确认，这是最可靠和简单的方法了。
要不，你可以尝试，把插入片段的左、右两边的序列给克隆测序。