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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？ 已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数，需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做，建议用探针法做。现在毫无头绪，不知道怎么设计，怎么合成？望各位高人指点一下……
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1楼 2011-12-22 16:26:31
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sandisk411

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-24 15:28:26
TaqMAN法和SYB法都可以用于检测拷贝数，关键是你能不能设计出合适的探针。用RT-PCR法鉴定拷贝数需要你对材料非常了解，比如是转基因T0代，如果是单拷贝的，插入目的基因与参考基因（基因组里单拷贝）的比值应是1:2；双拷贝的，就该是1:1；如果T1代，RT-PCR用于单株分析时，情况会很复杂，可以说你将无法准确判断，除非你已知是纯合的单株。
对于遗传背景不清楚的，你最好用SOURTHERN杂交确认，这是最可靠和简单的方法了。
要不，你可以尝试，把插入片段的左、右两边的序列给克隆测序。
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flytime1115
16楼2011-12-24 12:11:26
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计引物探针，构建质粒，定量
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2楼2011-12-22 16:45:28
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-22 18:29:07
楼主做的是专基因检测吗？如果是，那不建议用荧光定量，主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成，sybr法也能做，两种方法没有质变
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3楼2011-12-22 18:04:14
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by shaquila at 2011-12-22 18:04:14:
楼主做的是专基因检测吗？如果是，那不建议用荧光定量，主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成，sybr法也能做，两种方法没有质变

是做转基因检测，southern杂交在做，可是无法确定拷贝数，仅仅根据灰度值判断，觉得不太靠谱
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4楼2011-12-22 19:37:05
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