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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time??已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数,需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做,建议用探针法做。现在毫无头绪,不知道怎么设计,怎么合成?望各位高人指点一下……
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by sandisk411 at 2011-12-24 12:11:26:
TaqMAN法和SYB法都可以用于检测拷贝数,关键是你能不能设计出合适的探针。用RT-PCR法鉴定拷贝数需要你对材料非常了解,比如是转基因T0代,如果是单拷贝的,插入目的基因与参考基因(基因组里单拷贝)的比值应是1: ...

你后来建议的方法是genomic walking。可以做,我也正在尝试,可是这种方法还没有达到测出拷贝数的水平,技术有待提高。你说的遗传背景我不是很懂。希望您能再说的清楚一些,你说的单拷贝是什么意思,我不知道我的目的基因是几拷贝我才要测拷贝数呀?你说的“如果是单拷贝”指的是什么?
18楼2011-12-24 23:35:38
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物探针,构建质粒,定量
2楼2011-12-22 16:45:28
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shaquila

金虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-22 18:29:07
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变
3楼2011-12-22 18:04:14
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by shaquila at 2011-12-22 18:04:14:
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变

是做转基因检测,southern杂交在做,可是无法确定拷贝数,仅仅根据灰度值判断,觉得不太靠谱
4楼2011-12-22 19:37:05
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