| 查看: 3023 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
pyflxxx新虫 (小有名气)
|
[求助]
有关提取全血DNA和RNA问题。 已有1人参与
|
|
|
你好，本人新人，即将开始提取人全血RNA和DNA。 DNA用tiangen的盒子，RNA用TRIZOL提取。 DNA用于SNP基因分型。RNA用于做些病原学检测。 想请问：用于提取DNA的全血需要加多少ml样本量才够？ RNA呢？ 另外同时提取实在分身无术，如果第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA有影响吗？ RNA反转录和组织试剂反转录是一样的么？ 谢谢了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有215人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答
已经有13人回复
- 动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT)
已经有10人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- 关于RNA提取的问题
已经有8人回复
- 全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
已经有16人回复
- 提取RNA时，为何会有DNA条带，并且有且只有一条带？
已经有9人回复
- 【求助/交流】提取真菌DNA或RNA一定要液氮研磨吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！
已经有14人回复
- 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取质量验证及反转后cDNA质量验证问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】试剂盒提不出RNA，求救啊
已经有39人回复
- 【求助/交流】RNA的提取问题和qRT-PCR分析基因在不同时间的定量表达
已经有10人回复
4楼2011-12-22 17:09:37
pyflxxx
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 199.6
- 帖子: 116
- 在线: 8.7小时
- 虫号: 1351513
- 注册: 2011-07-20
- 性别: GG
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
2楼2011-12-22 13:36:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-22 18:29:52
amisking: 回帖置顶 2011-12-22 18:29:54
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-22 18:29:52
amisking: 回帖置顶 2011-12-22 18:29:54
|
你可以参考一下Qiagen 有关blood DNA 的kit 里面有介绍。 如200ul 全血的DNA产量在5-12ug左右。而1ml 的新鲜全血RNA含量在1-3ug左右。看你后续实验需要的用量决定使用多少全血，不过血液的核酸含量也会因人而有所差异，再加上所使用的提取方法也有一个效率问题，如果血液充足建议多用一点。 如果你的血液是加了抗凝剂的，第一天提RNA，剩余的血液可以放4度冰箱，第二天用来提DNA完全没问题。因为血液成份复杂，且其中的RNA含量少，所以采血后请尽快提RNA。不过你说用Trizol提可能会受体积限制（1ml Trizol处理100ul液体）。 |
3楼2011-12-22 17:00:09
【答案】应助回帖
| Trizol可以用于提取RNA,但是属于化学试剂，具有一定的毒性。Trizol和全血样本的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。还有你说的第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA我个人觉得是没什么影响 |
5楼2019-03-21 09:08:32
