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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关提取全血DNA和RNA问题。
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pyflxxx

新虫 (小有名气)

[求助] 有关提取全血DNA和RNA问题。已有1人参与

你好，本人新人，即将开始提取人全血RNA和DNA。
DNA用tiangen的盒子，RNA用TRIZOL提取。
DNA用于SNP基因分型。RNA用于做些病原学检测。

想请问：用于提取DNA的全血需要加多少ml样本量才够？
               RNA呢？
另外同时提取实在分身无术，如果第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA有影响吗？

RNA反转录和组织试剂反转录是一样的么？

谢谢了。
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1楼2011-12-22 13:34:29
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-22 18:29:52
amisking: 回帖置顶 2011-12-22 18:29:54
你可以参考一下Qiagen 有关blood DNA 的kit 里面有介绍。
如200ul 全血的DNA产量在5-12ug左右。而1ml 的新鲜全血RNA含量在1-3ug左右。看你后续实验需要的用量决定使用多少全血，不过血液的核酸含量也会因人而有所差异，再加上所使用的提取方法也有一个效率问题，如果血液充足建议多用一点。
如果你的血液是加了抗凝剂的，第一天提RNA，剩余的血液可以放4度冰箱，第二天用来提DNA完全没问题。因为血液成份复杂，且其中的RNA含量少，所以采血后请尽快提RNA。不过你说用Trizol提可能会受体积限制（1ml Trizol处理100ul液体）。
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伟大航线....
3楼2011-12-22 17:00:09
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pyflxxx

新虫 (小有名气)
噢，还有一个问题，冻存-80的全血，需要研磨吗？
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2楼2011-12-22 13:36:36
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pyflxxx at 2011-12-22 13:36:36:
噢，还有一个问题，冻存-80的全血，需要研磨吗？

如果不是抗凝的，有凝血块的情况则最好研磨一下，用玻璃匀浆器。
赞一下 回复此楼
伟大航线....
4楼2011-12-22 17:09:37
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Trizol可以用于提取RNA,但是属于化学试剂，具有一定的毒性。Trizol和全血样本的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。还有你说的第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA我个人觉得是没什么影响
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5楼2019-03-21 09:08:32
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