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pyflxxx新虫 (小有名气)
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[求助]
有关提取全血DNA和RNA问题。 已有1人参与
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你好，本人新人，即将开始提取人全血RNA和DNA。 DNA用tiangen的盒子，RNA用TRIZOL提取。 DNA用于SNP基因分型。RNA用于做些病原学检测。 想请问：用于提取DNA的全血需要加多少ml样本量才够？ RNA呢？ 另外同时提取实在分身无术，如果第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA有影响吗？ RNA反转录和组织试剂反转录是一样的么？ 谢谢了。 |
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pyflxxx
新虫 (小有名气)
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2楼2011-12-22 13:36:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-22 18:29:52
amisking: 回帖置顶 2011-12-22 18:29:54
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amisking: 回帖置顶 2011-12-22 18:29:54
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你可以参考一下Qiagen 有关blood DNA 的kit 里面有介绍。 如200ul 全血的DNA产量在5-12ug左右。而1ml 的新鲜全血RNA含量在1-3ug左右。看你后续实验需要的用量决定使用多少全血，不过血液的核酸含量也会因人而有所差异，再加上所使用的提取方法也有一个效率问题，如果血液充足建议多用一点。 如果你的血液是加了抗凝剂的，第一天提RNA，剩余的血液可以放4度冰箱，第二天用来提DNA完全没问题。因为血液成份复杂，且其中的RNA含量少，所以采血后请尽快提RNA。不过你说用Trizol提可能会受体积限制（1ml Trizol处理100ul液体）。 |
3楼2011-12-22 17:00:09
4楼2011-12-22 17:09:37
【答案】应助回帖
| Trizol可以用于提取RNA,但是属于化学试剂，具有一定的毒性。Trizol和全血样本的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。还有你说的第一天提取RNA，冻-80里，第二天再提取DNA我个人觉得是没什么影响 |
5楼2019-03-21 09:08:32
