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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接转化问题很烦呀。。
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索索00

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化问题很烦呀。。

小妹在这向各位请教2个问题：1；最近在做连接转化，对照质粒长的满满的，可是连接产物却是只有20-30个菌落，是连接问题，还是？。。
2；我前面做的一批质粒转化后长蓝斑了，可它又不像咱平常见的蓝斑，他周围是白色的，中间的是蓝色的，这是为什么呀？
谢啦。
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1楼 2011-12-17 08:03:53
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索索00

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by tian1203 at 2011-12-19 17:07:50:
片段太大菌会长的很少，做过1700的片段甚至只有几个菌。只要有正确的菌就可以。

恩 我要建库，要长700多的才行呢。愁死了！！
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13楼2011-12-21 12:54:23
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tian1203

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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看天(金币+2): 鼓励交流 2011-12-21 12:45:29
片段太大菌会长的很少，做过1700的片段甚至只有几个菌。只要有正确的菌就可以。
赞一下(2人) 回复此楼
别紧张，我不是什么好人...
9楼2011-12-19 17:07:50
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-17 22:26:42
长的少没关系 能挑出来正确的不就好了 可能是连接酶效率不高吧
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2楼2011-12-17 20:20:56
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

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看天(金币+3): 鼓励回答 2011-12-21 12:44:38
周围是白色的，中间的是蓝色的
是显色不充分，在4度放置一段时间，让它充分显色。
连接产物如果过大不好连，调整载体和目的片段比例。
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3楼2011-12-18 10:25:23
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cxcx1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by yuanbo934 at 2011-12-18 10:25:23:
周围是白色的，中间的是蓝色的
是显色不充分，在4度放置一段时间，让它充分显色。
连接产物如果过大不好连，调整载体和目的片段比例。

您好，关于载体与目的片段比例的问题，如果载体与目的片段大小均为2000bp左右，并且二者都是通过PCR得到的，二者的比例大致该怎么样调整会连接的好点儿呢？自连的比例会少点儿呢？
非常感谢您。。。
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4楼2011-12-18 12:17:52
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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看天(金币+2): 鼓励回答 2011-12-21 12:45:09
载体与连接片段比例为1：7一般效果比较好。
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5楼2011-12-18 15:01:16
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荣rong006

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到这样的问题，不过可以挑来试试，有的是连上的。
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6楼2011-12-18 20:27:20
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索索00

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by yuanbo934 at 2011-12-18 10:25:23:
周围是白色的，中间的是蓝色的
是显色不充分，在4度放置一段时间，让它充分显色。
连接产物如果过大不好连，调整载体和目的片段比例。

都放一星期了呢。
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7楼2011-12-19 07:36:41
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索索00

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-18 15:01:16:
载体与连接片段比例为1：7一般效果比较好。

我用的是1:4，这个应该算实验室比较好的。谢谢。
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8楼2011-12-19 07:38:10
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我也想请教一下下，那个卫星菌落会是什么原因呢？就是连接比例的问题吗？
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10楼2011-12-20 00:04:10
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