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索索00

铁虫 (小有名气)

[求助] 连接转化问题很烦呀。。

小妹在这向各位请教2个问题:1;最近在做连接转化,对照质粒长的满满的,可是连接产物却是只有20-30个菌落,是连接问题,还是?。。
2;我前面做的一批质粒转化后长蓝斑了,可它又不像咱平常见的蓝斑,他周围是白色的,中间的是蓝色的,这是为什么呀?
谢啦。
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cxcx1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by yuanbo934 at 2011-12-18 10:25:23:
周围是白色的,中间的是蓝色的
是显色不充分,在4度放置一段时间,让它充分显色。
连接产物如果过大不好连,调整载体和目的片段比例。

您好,关于载体与目的片段比例的问题,如果载体与目的片段大小均为2000bp左右,并且二者都是通过PCR得到的,二者的比例大致该怎么样调整会连接的好点儿呢?自连的比例会少点儿呢?
非常感谢您。。。
4楼2011-12-18 12:17:52
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-17 22:26:42
长的少没关系 能挑出来正确的不就好了 可能是连接酶效率不高吧
2楼2011-12-17 20:20:56
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-12-21 12:44:38
周围是白色的,中间的是蓝色的
是显色不充分,在4度放置一段时间,让它充分显色。
连接产物如果过大不好连,调整载体和目的片段比例。
3楼2011-12-18 10:25:23
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-12-21 12:45:09
载体与连接片段比例为1:7一般效果比较好。
5楼2011-12-18 15:01:16
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