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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 有关基因敲除

在一个载体上有形如A-B-A式的基因，将B插入A中，在酶切验证电泳图中，应该有那些信息啊？用什么作对照？不知道我说明白了没有，嘻嘻。
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1楼 2011-12-16 19:39:33
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果子么么茶

木虫 (著名写手)
★
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感觉表达不是很明白 将B基因插入到载体上A基因的特定位点么？ 不过对照的话 插入前的空载体酶切做对照
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2楼2011-12-16 23:03:53
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2011-12-16 23:03:53:
感觉表达不是很明白 将B基因插入到载体上A基因的特定位点么？ 不过对照的话 插入前的空载体酶切做对照

是特定的位点。而且这个位点也是通过酶切而得的。所以不能用你说的那个作对照吧？
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3楼2011-12-16 23:56:32
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thetc

木虫 (小有名气)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励下 2011-12-17 12:39:53
B基因上有你所用的酶的酶切位点吗？  如果没有的话你在做融合基因的酶切后电泳的话  比较于原来未能融合的基因来说 条带会不一样，融合基因的条带会长上一些，未融合的应该是短的。
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4楼2011-12-17 00:10:20
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by thetc at 2011-12-17 00:10:20:
B基因上有你所用的酶的酶切位点吗？  如果没有的话你在做融合基因的酶切后电泳的话  比较于原来未能融合的基因来说 条带会不一样，融合基因的条带会长上一些，未融合的应该是短的。

有的。两个基因用同样的酶进行酶切的。不然也没办法连上吧？还有其他的高见吗？呵呵
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5楼2011-12-17 00:16:36
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yguang

木虫 (职业作家)
★
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简单的如酶切，PCR（设计各种引物），复杂的如southern杂交等，想验证这样的实在太多方法了！
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6楼2011-12-17 05:51:04
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励 2011-12-17 12:40:04
可以测序部份插入序列，也不贵就两个反应，五十大洋
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7楼2011-12-17 06:45:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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piaoyunokok(金币+1): 多谢啦 2011-12-19 21:47:21
做酶切，根据切出来的条带数目和大小判断。
找个在A和B上面都有的酶切位点，做个单酶切。
没有合适的位点的话，就做个双酶切，一个位点在A上，一个在B上。

最好不要用克隆时的位点，会有假阳性。
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8楼2011-12-17 12:42:22
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