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foreverjohn金虫 (小有名气)
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[求助]
RNA 电泳25min 与10 min的区别
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最近跑了一次RNA非变性电泳，RNA+loading buffer 65 oC 10min，然后4 oC，电泳使用的是实验室常用电泳槽，洗涤剂洗涤，双氧水浸泡30min，DEPC处理水配置的高压灭菌电泳液，电泳设置为150V，约10V/cm，发现电泳10min时，26S：18S<1,而电泳时间25min时，26S：18S>2（这是降解产生的么），并且26S上面有大量弥散的带（这是DNA污染吗？）。  |
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 生物技术 |
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shaquila
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2楼2011-12-15 21:37:38
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3楼2012-01-13 10:22:36
【答案】应助回帖
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我觉得你的RNA提得挺好的。 10V/cm可能电压有点大，调小一点吧，marker跑起来都有点变形了～ 另外，你跑非变性胶上样前不用60度处理的吧？我一般是不处理的，直接上。 你10min时那个26S还没完全跑开，故染色看起来没有18s亮，但不能就这样判断26S:18S<1；20min后，条带完全跑开了，所以26S亮度正常回来了。 DNA污染不是迷散的带。你marker也有迷散....估计是有些杂质或曝光太强了，把一些微弱的东西也拍出来了。 |
4楼2012-01-13 15:51:55
神经再生
铁杆木虫 (著名写手)
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