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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 电泳25min 与10 min的区别
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foreverjohn

金虫 (小有名气)

[求助] RNA 电泳25min 与10 min的区别

最近跑了一次RNA非变性电泳，RNA+loading buffer 65 oC 10min，然后4 oC，电泳使用的是实验室常用电泳槽，洗涤剂洗涤，双氧水浸泡30min，DEPC处理水配置的高压灭菌电泳液，电泳设置为150V，约10V/cm，发现电泳10min时，26S：18S<1,而电泳时间25min时，26S：18S>2（这是降解产生的么），并且26S上面有大量弥散的带（这是DNA污染吗？）。
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1楼 2011-12-15 20:33:52
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-15 23:48:46
foreverjohn(金币+1): 2012-03-10 11:52:09
我觉得你染色和拍照的问题！一般先讲解的是26S，如果讲解不是很严重，26比18逐渐减小，26条带下面开始SMEAR，讲解严重，18也讲解，比例就很乱了。
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2楼2011-12-15 21:37:38
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跳动的RNA

禁言 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币-3, 违规存档): 广告 2012-01-13 11:12:19
本帖内容被屏蔽
3楼2012-01-13 10:22:36
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励积极分享经验 2012-01-13 17:24:27
我觉得你的RNA提得挺好的。
10V/cm可能电压有点大，调小一点吧，marker跑起来都有点变形了～
另外，你跑非变性胶上样前不用60度处理的吧？我一般是不处理的，直接上。
你10min时那个26S还没完全跑开，故染色看起来没有18s亮，但不能就这样判断26S:18S<1；20min后，条带完全跑开了，所以26S亮度正常回来了。
DNA污染不是迷散的带。你marker也有迷散....估计是有些杂质或曝光太强了，把一些微弱的东西也拍出来了。
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伟大航线....
4楼2012-01-13 15:51:55
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2012-01-15 11:35:58
首先说下我的方法：如果不做变性电泳就应该做快速电泳，250v+5min，这样可以尽量避免RNA的降解。再者RNA电泳图从上至下应该是28s  18s   5s 。 26s是什么说法？28S的亮度应该是18S的二倍，5S比较暗淡。结果才是理想的。还有如果120v跑电泳至少得20分钟吧
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
5楼2012-01-14 13:43:00
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): Good!另外条带间的亮度比也不是一定的。。 2012-01-15 11:36:39
250v楼上的你得看多长的电泳槽吧？有10cm、20cm、30cm不等的电泳槽。
也并不是所有的5S都比较淡，5S的多少跟你所选取的提取方法、样品本身有关系的。
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伟大航线....
6楼2012-01-15 09:07:58
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