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foreverjohn

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[求助] RNA 电泳25min 与10 min的区别

最近跑了一次RNA非变性电泳，RNA+loading buffer 65 oC 10min，然后4 oC，电泳使用的是实验室常用电泳槽，洗涤剂洗涤，双氧水浸泡30min，DEPC处理水配置的高压灭菌电泳液，电泳设置为150V，约10V/cm，发现电泳10min时，26S：18S<1,而电泳时间25min时，26S：18S>2（这是降解产生的么），并且26S上面有大量弥散的带（这是DNA污染吗？）。

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1楼 2011-12-15 20:33:52

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shaquila

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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-15 23:48:46
foreverjohn(金币+1): 2012-03-10 11:52:09

我觉得你染色和拍照的问题！一般先讲解的是26S，如果讲解不是很严重，26比18逐渐减小，26条带下面开始SMEAR，讲解严重，18也讲解，比例就很乱了。

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2楼2011-12-15 21:37:38

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跳动的RNA

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西瓜(金币-3, 违规存档): 广告 2012-01-13 11:12:19

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3楼2012-01-13 10:22:36

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longrna

新虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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小丹木木(金币+2): 鼓励积极分享经验 2012-01-13 17:24:27

我觉得你的RNA提得挺好的。
10V/cm可能电压有点大，调小一点吧，marker跑起来都有点变形了～
另外，你跑非变性胶上样前不用60度处理的吧？我一般是不处理的，直接上。
你10min时那个26S还没完全跑开，故染色看起来没有18s亮，但不能就这样判断26S:18S<1；20min后，条带完全跑开了，所以26S亮度正常回来了。
DNA污染不是迷散的带。你marker也有迷散....估计是有些杂质或曝光太强了，把一些微弱的东西也拍出来了。

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伟大航线....