| 查看: 1999 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
songxiaobop金虫 (小有名气)
|
[求助]
3'RACE做了几次，为什么老是这样子，大家看一下帮帮忙吧，苦闷死了！~
|
||
用的是TAKARA的盒子 这个是做巢式PCR的第一轮扩增，似乎是又一条带，然后就按照说明书的要求，取1微升做了第二轮扩增，结果是这个样子。 然后几次做的都是下边这样的：  反转录体系中要求RNA的量是1微克，可是我感觉自己提的RNA浓度比较低，反转录体系是10微升的，怎样保证反转录的效果，怎样检测？ 巢式扩增是不是按照说明书上的50微升体系比较好？ 这样的结果应该怎样调整一下体系？ 快毕业了，很是着急苦闷啊 。 求大家帮帮忙！    [ 来自科研家族 深海家族 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有167人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 5‘RACE做了大半年无果
已经有3人回复
- 兄弟姐妹们来帮我看下根据这几个线索能否确定一个pcr产物是否为我要的片段
已经有1人回复
- 氨苄平板长杂菌
已经有7人回复
- RACE产物太少，结果很差，求分析体系
已经有13人回复
- 3‘race的怪异现象
已经有6人回复
- 关于miRNA靶基因RACE的问题
已经有0人回复
- 3RACE问题
已经有5人回复
- 【死亡飞车1+2+3】【经典动作】
已经有300人回复
- 求助~RACE扩增不出目的条带
已经有11人回复
- 3‘race相同操作，结果无法重复
已经有0人回复
【答案】应助回帖
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！whs 2011-12-07 11:43:58
songxiaobop(金币+2): 2011-12-19 08:42:46
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！whs 2011-12-07 11:43:58
songxiaobop(金币+2): 2011-12-19 08:42:46
| 最好是每做一步都做检测，提取RNA后检测RNA的完整性，如果质量不好，RACE很难出结果。一般来说3RACE相对容易做，建议多设计几条RACE引物，一般来说扩增出来的条带全部回收后测序（一条带很可能不是我们感兴趣的），当然大部分是无用的序列，可能只有十分之一二才是目的序列。做RACE是个很熬人的活，我最近做了7个基因的RACE,设计了50多条RACE引物，做了三四轮RACE,回收片段多达120多个，全部做了TA克隆，测序不下200个样，到目前为止6个基因是扩增到全长了，其中一个还是没有拿到目的片段，打算放弃了。做RACE是个体力活，依个人经验来看，回收一两个片段就能得到感兴趣的基因是不可能的。 |
4楼2011-12-06 23:43:19
zcy1214
木虫 (著名写手)
普通青年
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1878.7
- 散金: 750
- 红花: 2
- 帖子: 1513
- 在线: 175.2小时
- 虫号: 1113932
- 注册: 2010-10-04
- 性别: GG
- 专业: 果树学
2楼2011-12-06 18:27:48
songxiaobop
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 537.1
- 帖子: 165
- 在线: 54.1小时
- 虫号: 972046
- 注册: 2010-03-15
- 性别: GG
- 专业: 果树学
3楼2011-12-06 22:10:46
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2011-12-07 10:00:36
10