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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

[求助] pcr扩增无产物

我做的是真菌的ISSR-PCR，模板是用试剂盒提取出来的。
采用的引物是按文献上的引物买的
采用的体系是
10倍pcr buffer  2.5
dntps               0.4
primer              2.0
镁离子       1.5
模板DNA          2.0
TaqE                0.5
程序是：94℃ 300s --94℃ 60s --37℃ 60s --72℃ 60s （40个循环）--72℃ 10s-- 4℃

跑了几次都没见任何荧光出现。到底出了问题？
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1楼 2011-12-05 12:04:11
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

荧光定量PCR？
首先37℃的退火温度好低啊，一般PCR用55℃，你这是特殊的引物？
其次72℃ 10s这个应该是72℃ 10min吧？不过这一步对有没有产物影响不大。
体系里面各个成分的浓度没有说明，不能判断。
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2楼2011-12-05 18:15:50
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