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xiaoyang123金虫 (小有名气)
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PCR产物用CyberGreen染色时遇到的问题
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今天第一次用SYBR Green代替EB进行染色，照胶后显示的结果有点诡异：marker和引物二聚体异常明显，和marker一样亮，其它的条带什么都没有，干干净净的。并且1000bp的引物没有跑开，全都聚集在底部，且拖带严重。重复了两次实验均是以上结果。 我的目标片段在1100bp左右，会不会是跑出来了但是没染上，看marker的样子，貌似越接近底部（即分子量越低），条带越亮，而胶的中上部分几乎没有任何条带了。 不知是否是我的使用方法出现了问题——我配了40mL的胶（1%琼脂糖），在倒胶前，几乎不烫手的时候，加入4μL的SYBR Green（如说明书所示1/10000），混匀后倒胶。 跑完电泳立刻照胶。 会不会是因为没有静止足够的时间呢，或者SYBR Green比较不容易和长片段结合？ 之前用EB泡胶的时候引物二聚体并没有这么严重，而且有许多条带（包括许多非特异性扩增），可是用SYBR Green却是以上结果。感觉有点诡异，不知何解，还望各位多多指教~~~ |
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