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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酿酒酵母的纯培养
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z-w-p

新虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母的纯培养

最近提酿酒酵母基因组发现总是被细菌污染，分析觉得操作过程中引入细菌污染的可能性不大。怀疑是菌体培养过程中被污染的，进行过划线挑单菌落、平板稀释挑单菌落，而后接种YPD培养。提取基因组之前，也进行了显微镜镜检，发现是酵母细胞形态，没有其他的细菌存在。但是之后的基因组还是能P出16S的条带，请问各位，在这方面有没有什么好的经验和方法，能分离出酵母纯种，万分感谢！！
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1楼2011-11-22 14:08:59
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eleanorsnow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
zhang8826857(金币+2): 新虫加油 2011-11-23 08:39:38
z-w-p(金币+1): 试剂盒换了好几个了，PCR也做阴阳性对照的，阴性对照没有目标条带，所以应该不会是试剂污染。多谢倾情帮助，嘿嘿 2011-11-24 20:50:34
如果镜检看不出来，是不是提取基因组的盒子污染了，换个新盒子试试，或者PCR所用的试剂有污染，多方面查找一下，先别纠结于菌不纯。
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3楼2011-11-23 08:37:36
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虫儿7893

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-23 08:39:30
z-w-p(金币+2): 胶回收？怎么解释，呵呵。在培养基里面加抗生素还真不想到，谢谢，高手 2011-11-24 20:49:18
楼主何不跑胶回收一下了事~
平板划线挑单菌落应该是没有问题的，建议楼主多划几次，或者在培养基里加点抑制细菌生长的抗生素。
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2楼2011-11-23 08:26:45
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zuody2010

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

16S很容易被污染，确保体系在无菌环境下进行，同时用实验用水作对照P一下
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用扯淡的心态，来面对这操蛋的人生！
4楼2011-11-23 10:08:01
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虫儿7893

银虫 (小有名气)
把PCR过的体系大剂量跑电泳，把目的条带切下来，用试剂盒回收。
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5楼2011-11-28 09:05:45
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