应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过overlap PCR的虫子过来看看
21/1返回列表
查看: 3629  |  回复: 19
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 做过overlap PCR的虫子过来看看

我准备用in-frame deletion 做基因敲除 里面有一步是需要用overlap PCR扩增片段用以构建敲除质粒 我看PROTOCOL FOR IN-FRAME DELETION MUTAGENESIS
(A. Beliaev, S.B. Reed, D. Stanek, D. Saffarini, M. Romine)里面介绍的时候说overlap PCR的引物设计时需要加一个tag，就是扩增的两个片段有一块是互补的，上面指写了要小于21bp，那这段序列应该是自己在设计引物加上去的，可这段序列是自己随便编一段，还是有设计依据的啊？困惑中......
PS 我不需要在这段里面加入酶切位点
谢谢各位虫子 小女子在此谢过
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 实验技巧以及英语学习相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-21 13:38:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

A406

新虫 (初入文坛)
★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流。跟2楼是一个意思。 2011-11-22 18:00:53
是叫重叠PCR吧 这种PCR可以把两片段定向连起来，关键是你目的是想把两片段怎么连接上，两片段为A、B，共四条引物，其中A片段下游引物5‘端要包含B片段上游序列约20bp，B片段上游引物5’端要包含A片段下游序列约20bp，另外两引物没有特别要求 按引物设计原则。PCR按说明操作。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-11-22 13:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 syn1985 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭