24小时热门版块排行榜    

查看: 1876  |  回复: 9

zhaolijunzly

金虫 (小有名气)

[求助] TA克隆不长菌

我的TA克隆不长菌,阳性对照很好,说明感受态没有问题,氨苄的板子是刚配的,连接比例1:9左右,哪出问题了呢?望同仁们指教一二,不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-21 11:07:31
加入感受态的质粒量在5ul内?
目的基因扩增是用高保真酶的话加A了?
目的基因和质粒是否保持良好?
修炼ing,当虫仙……
2楼2011-11-21 10:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

转化效率低;
连接有问题。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
3楼2011-11-21 10:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenqian0216

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaolijunzly: 金币+5, 有帮助 2012-05-26 10:40:28
应该是连接有问题,延长连接时间。
或是回收电泳时有核酸酶末端TA被水解了,建议回收电泳前处理电泳槽
4楼2012-05-19 09:50:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolijunzly

金虫 (小有名气)

怎么发放金币
5楼2012-06-05 13:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水月寺学徒

金虫 (小有名气)

江湖浪子,行游诗人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaolijunzly: 金币+5 2012-06-10 13:27:47
链接比例1:9不是很好吧,如果胶回收亮度还可以建议直接1:1就很好连了,目的片段浓度太高会影响连接质量的
活出生而为龙的狷狂
6楼2012-06-07 18:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

我目前也遇到了这个问题,
加A后PCR产物:2ul
pMD 19:0.5ul
Buffer(solution I)3.5ul
过夜连接:12-16h
之后用JM109感受态细胞进行转化
涂LE平板(1ml的100mg/ml 氨苄加入到1L的LB培养基)
昨天下午2点半涂完平板(100ul菌液)
37℃培养到晚上10点半,之后置于室温下(20℃)到今早,发现没长- -
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
7楼2012-06-11 11:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolijunzly

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Marado at 2012-06-11 11:05:11
我目前也遇到了这个问题,
加A后PCR产物:2ul
pMD 19:0.5ul
Buffer(solution I)3.5ul
过夜连接:12-16h
之后用JM109感受态细胞进行转化
涂LE平板(1ml的100mg/ml 氨苄加入到1L的LB培养基)
昨天下午2点半 ...

你的PCR产物得胶回收后定量,才能连接。现在我的做出来了
8楼2012-06-11 16:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晓木蟲

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaolijunzly at 2012-06-11 16:04:58
你的PCR产物得胶回收后定量,才能连接。现在我的做出来了...

PCR回收产物怎么定量?

发自小木虫Android客户端
9楼2016-05-15 08:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

10楼2016-05-15 10:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaolijunzly 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +4 晴天加油 2026-08-26 5/250 2026-08-26 21:27 by 木风9012
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
信息提示
请填处理意见