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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhaolijunzly

金虫 (小有名气)

[求助] TA克隆不长菌

我的TA克隆不长菌,阳性对照很好,说明感受态没有问题,氨苄的板子是刚配的,连接比例1:9左右,哪出问题了呢?望同仁们指教一二,不胜感激!
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zhaolijunzly

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Marado at 2012-06-11 11:05:11
我目前也遇到了这个问题,
加A后PCR产物:2ul
pMD 19:0.5ul
Buffer(solution I)3.5ul
过夜连接:12-16h
之后用JM109感受态细胞进行转化
涂LE平板(1ml的100mg/ml 氨苄加入到1L的LB培养基)
昨天下午2点半 ...

你的PCR产物得胶回收后定量,才能连接。现在我的做出来了
8楼2012-06-11 16:04:58
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-21 11:07:31
加入感受态的质粒量在5ul内?
目的基因扩增是用高保真酶的话加A了?
目的基因和质粒是否保持良好?
修炼ing,当虫仙……
2楼2011-11-21 10:17:22
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

转化效率低;
连接有问题。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
3楼2011-11-21 10:23:50
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wenqian0216

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaolijunzly: 金币+5, 有帮助 2012-05-26 10:40:28
应该是连接有问题,延长连接时间。
或是回收电泳时有核酸酶末端TA被水解了,建议回收电泳前处理电泳槽
4楼2012-05-19 09:50:31
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