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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA中抗体稀释问题求教
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饼哥

木虫 (正式写手)

[交流] ELISA中抗体稀释问题求教

虫友们，我最近在做间接ELISA，想问一下大家在做这个实验时都用什么去稀释一抗和二抗？我自己用的是0.01MPBS，但感觉效果不是很好。虫友们说说自己的情况呗。
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1楼 2011-11-17 19:20:19
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快乐至上0220

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
173973楼: Originally posted by 饼哥 at 2012-05-30 13:58:53
我直接用pH7.4的0.01MPBS稀释的，我的一抗是多抗，现场采的患病羊血清。效果不错，文章已经投出去了。...

请问你的血清中添加量是多少？
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9楼2013-01-09 16:20:25
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dongjie1209

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
饼哥(金币+1): 嗯，我决定再试几次，摸索一下条件 2011-11-18 09:22:08
我也用的PBS，挺好的啊。估计是一抗浓度还没有弄清楚~倍比稀释，找到一抗和样品结合的最佳比例

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2011-11-17 23:19:29
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小猪0452

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
饼哥(金币+1): 我用了几种，做个对比，呵呵！ 2011-11-20 12:54:41
PBSTB：0.05% TWEEN-20 ，1%BSA
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3楼2011-11-19 16:30:44
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vetzhang

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一般来讲PBST做稀释液的效果要好于PBS，因为T即吐温20（0.05%-0.1%）0.05%常用，作为洗液和血清及二抗稀释液的缓冲液可以消除非特异性反应。
另外为降低非特异性反应，常用一抗稀释液为PBST中加如下物质：
1. 1%-3%的BSA（1%BSA常用）
2. 2%-5%脱脂乳（5%脱脂乳常用）
3. 0.25-%2%的明胶（猪源/牛源/鱼源明胶皆可，检测猪源血清最好不要用猪源明胶，常用浓度1%）
4. 其他常用非特异性反应保护剂还有如0.5%PVA、 1%酪蛋白、5%-10%马血清等。
二抗稀释液可以和一抗稀释液相同或直接用PBST即可。
其他还有很多配方，望多加摸索，你可以看看ELISA 手册在网上搜搜挺多的。有什么问题还可以在交流。
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4楼2012-02-18 15:38:12
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