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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

[求助] pcr反应体系 已有1人参与



我第一次做平pcr，想请教虫友门体系是怎样算的呢？？
我查文献上说用的体系是 Taq E       2.0U
                                         镁离子   1.5mmol/l
                                        dntp         0.15mmol/l
                                         引物     0.75mmol/l
                                        模板dna   200ng
然而我买的试剂的浓度分别是 Taq E       1U /ul
                                               10倍的buffle（含镁离子）  25mmol/l
                                               dntp         10mmol/l
怎样从试剂上的浓度换算成我文献需要的浓度啊？？
引物合成报告单上怎么算引物的浓度呢？？

[ Last edited by sun1123moon on 2011-11-19 at 09:46 ]
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1楼 2011-11-17 18:19:03
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Sureking

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

以20ul体系为例：taq酶2ul，buf 2u，dntp：0.3ul，primer：1.5ul，template：适当量。加水补足20ul。引物的使用是用合成后的nmol量（）乘以10 ul的水溶解，作为母液。将母液再稀释十倍用以平时使用（母液A：5ul，母液S：5ul+90ul水）
l
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Sureking
2楼2011-11-19 20:49:33
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

说明书里应该都会有注明，建议根据比例添加
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