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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

[求助] pcr反应体系 已有1人参与



我第一次做平pcr,想请教虫友门体系是怎样算的呢??
我查文献上说用的体系是 Taq E       2.0U
                                         镁离子   1.5mmol/l
                                        dntp         0.15mmol/l
                                         引物     0.75mmol/l
                                        模板dna   200ng
然而我买的试剂的浓度分别是 Taq E       1U /ul
                                               10倍的buffle(含镁离子)  25mmol/l
                                               dntp         10mmol/l
怎样从试剂上的浓度换算成我文献需要的浓度啊??
引物合成报告单上怎么算引物的浓度呢??

[ Last edited by sun1123moon on 2011-11-19 at 09:46 ]
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Sureking

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

以20ul体系为例:taq酶2ul,buf 2u,dntp:0.3ul,primer:1.5ul,template:适当量。加水补足20ul。引物的使用是用合成后的nmol量()乘以10 ul的水溶解,作为母液。将母液再稀释十倍用以平时使用(母液A:5ul,母液S:5ul+90ul水)
l
Sureking
2楼2011-11-19 20:49:33
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

说明书里应该都会有注明,建议根据比例添加

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