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全血基因组的提取问题
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我昨天用axygen的全血基因组提取试剂盒提了20多个血液样本，因为时间来不及，就分装了20ul放在4℃冰箱里今天下午来跑胶，结果虽然都在20kbp左右，但是除了个别以外，条带都很暗，很勉强看得到一点，即使看得到的也都很细稀释50倍的浓度根本测不出来。我看了我师兄的毕业论文，他也是用的axygen的试剂盒，但是他的条带都很亮，浓度有20~30ng/ul，我是第一次做这个，实验室其他人也都没有做这方面的，想请问一下问题出在哪里呢？ 我用的是EDTA K2的抗凝全血，在医院4度冰箱已经放了一天了，拿回来的时候已经分层，我上下颠倒混匀后吸取的250ul的体积进行抽提。加AP2后涡旋至整管由暗红色变成棕色泥浆状，最后65℃TE加了140ul，不知道是不是有点太多了。跑胶用的0.7%，90V，45min 请大家帮忙看看问题会在哪里吧，谢谢大家！ |
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3楼2011-11-13 14:32:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 鼓励新朋友回帖应助！谢谢！ 2011-11-14 16:26:51
古韵清音(金币+4): 谢谢，以后遇到问题希望还能向你请教 2011-11-14 16:57:34
wanhscn(金币+4): 鼓励新朋友回帖应助！谢谢！ 2011-11-14 16:26:51
古韵清音(金币+4): 谢谢，以后遇到问题希望还能向你请教 2011-11-14 16:57:34
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200ul 血液（人）的DNA产量约5-10ug。人不一样产量不一样。 稀释50倍测不了那你使用原液测呗，NanoDrop可以直接使用1ul的样品测的，你看哪有使用此仪器的。你稀释50倍才测的估计是老式的紫外，使用比色杯的。 EDTA抗凝血没有问题。4度冰箱放一天不至于影响血液DNA的提取，虽然比起新鲜血液产量稍低一点点。 血液提取（你是使用硅胶柱还是异丙醇沉淀？）关键地方在消化这一步骤上。要确保充满消化，使其DNA释放出来。 |
2楼2011-11-13 14:31:08
4楼2011-11-13 20:41:11
5楼2011-11-14 09:30:51
20