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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE老是跑偏，帮忙解决一下啊。
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2008228003

铁虫 (小有名气)

[求助] DGGE老是跑偏，帮忙解决一下啊。

采用的是V3区的引物
变性梯度30~55%
200V,5h
以经跑了很多次，每次都会遇到边上有一条或两条跑偏。
（边缘已经空出了一个泳道）
做过的帮看看是什么原因。
是漏胶？还是旁边电泳时密封不严，电流跑偏了？



另外，再问一个问题。由于这张图是扫描成像拍的，很多弱的条带也能拍出来来。但在蓝盾下就看不到了，切胶的时候，怎么办，还要继续加大上样量吗？
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1楼2011-11-10 21:53:53
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这是DGGE方法的限制，边缘的2个泳道很容易变形。所以最好不要加样。具体为什么会变形，也许是灌胶的时候边缘由于表面张力会有一点点漏胶，不可避免。所以灌胶要均匀，慢速。注意是慢速。
如果你有20个样品的话，就要用25个梳子孔的那个梳子呀，左右空5个空。剩下的20个样品绝对不会变形。
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2楼2011-11-11 12:40:42
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

2008228003(金币+10): 谢谢 2011-11-23 11:28:56
对于第二个问题，你可以尝试调节梯度范围，放你的条带都处于正中位置，条带分得更开些。再稍微加大加样量。但我觉得效果不会很好。
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3楼2011-11-11 12:42:41
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

垂直电泳最边上的泳道都会偏的，我跑双向电泳也是。是因为边上的电场不是均匀的直线而导致的。
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4楼2011-11-11 13:36:03
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