应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高保真酶PCR
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 4451  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] 高保真酶PCR

求教：为什么用高保真酶PCR时，经常P不出来？我知道高保真酶的扩增效率比普通Taq要差很多，可是明明前一次能P出来，再做一次就P不出来了。换模板，换引物，换dNTP，但是结果反复不定，我都快要崩溃了。用的是生工的pfu酶，本来想是不是酶的问题，想换宝生物的Ex Taq，结果有师兄用Ex Taq也经常P不出来。我们俩是同样的样品，用的兼并引物。请问有谁遇到过类似的问题吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-06 22:50:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
可以在反应体系中加入0.01%的白明胶或Triton X-100,有助于加大反应的特异性。
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-17 22:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

ureyguo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

mahoumeimei(金币+2): 因为克隆测序。模板、引物的原因都已经排除了。 2011-11-07 08:41:01
你为什么要用高保真得酶，有啥特殊要求吗？没有你就用普通的酶p，extaq还不错的，找找其他的原因比如模板，引物。还有pcr前一次能p出来后一次p不出来很正常啊。做环境微生物的你懂的！
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-06 23:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilyxieyx

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

mahoumeimei(金币+2): 用同一个试剂盒做过两种引物的PCR，都是结果很反复，有时候能出来，有时候出不来。 2011-11-07 08:42:56
先换一对引物p个短一点的片段，排除酶和试剂的问题，如果还是p不出你的片段可能是片段太长或引物和模板不太匹配，需要重新设计引物。
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-07 03:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
mahoumeimei(金币+5): 恩，是混合DNA。之前有试过用pfu+Taq混合着用，不过摸不准合适的比例，BSA倒可以试试看。 2011-11-07 10:10:07
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 有经验的虫子哦！ 2011-11-07 16:58:50
用简并引物扩宏基因组DNA（你的模板应该是混合DNA吧）是难度挺大的，我们课题组就专门做这个的，我们大多时候都是用rtaq去扩的，换用高保真酶如PfuUltra® II Fusion HS DNA Polymerase，或NEB的EXtaq都难扩出来的。若要保真度高些，建议你可以用高保真酶再添加rtaq进去混合PCR试试，这样具有一定的效果，要是模板很复杂如有杂质腐殖酸之类的建议添加BSA进去可以提高特异性。
赞一下(1人) 回复此楼
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
4楼2011-11-07 09:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291分调剂 +8 上岸小莹加油 2026-04-09 9/450 2026-04-15 00:41 by zzzggc
[考研] 材料工程085601，270求调剂 +42 @ASDF1234 2026-04-08 46/2300 2026-04-14 18:12 by 逍遥三郎
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 2本，初试303，0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 本人女孩 +7 吼吼， 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭