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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高保真酶PCR
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] 高保真酶PCR

求教：为什么用高保真酶PCR时，经常P不出来？我知道高保真酶的扩增效率比普通Taq要差很多，可是明明前一次能P出来，再做一次就P不出来了。换模板，换引物，换dNTP，但是结果反复不定，我都快要崩溃了。用的是生工的pfu酶，本来想是不是酶的问题，想换宝生物的Ex Taq，结果有师兄用Ex Taq也经常P不出来。我们俩是同样的样品，用的兼并引物。请问有谁遇到过类似的问题吗？
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1楼 2011-11-06 22:50:30
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ureyguo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

mahoumeimei(金币+2): 因为克隆测序。模板、引物的原因都已经排除了。 2011-11-07 08:41:01
你为什么要用高保真得酶，有啥特殊要求吗？没有你就用普通的酶p，extaq还不错的，找找其他的原因比如模板，引物。还有pcr前一次能p出来后一次p不出来很正常啊。做环境微生物的你懂的！
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2楼2011-11-06 23:50:36
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