| 查看: 1779 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求高手解救荧光定量的问题
|
||
|
最近最荧光定量试验，一直很不顺，用的是bioer的试剂，IQ5的机器。做的是miRNA的相对定量表达，用的是∆∆CT法，所扩增的片段有点大，但在200bp之内，出现很奇怪的现象，附上图： 扩增曲线： 溶解曲线： 很是疑惑为什么前面的曲线不平，应该不是机器的问题，因为其他人做没有出现这样的现象，我把浓度给变大10倍也没有很好的改观，求高手指教，非常感谢！  扩增曲线  溶解曲线  溶解曲线的倒数图 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的一个问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR引物跨内含子的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR中组织保存问题
已经有15人回复
- 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】荧光定量引物设计遇到的问题
已经有3人回复
3楼2011-11-23 10:40:04
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-06 08:16:04
小橘子~(金币+1): 非常感谢你认真的分析和建议 2011-11-06 10:04:03
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-06 08:16:04
小橘子~(金币+1): 非常感谢你认真的分析和建议 2011-11-06 10:04:03
|
你说的“前面的曲线不平”是什么意思？ 从你的扩增曲线来看，是模板浓度太低了。按照2的N次方扩增，模板浓度大10被，Ct值只变小3，10倍还是不够的。一般情况下，15~20个循环左右扩增曲线起来比较合适。 你的部分样品35个循环后才有扩增，有点夸张……因为一般认为，阴性对照35个循环之前没有扩增是正常的…… 虽然这样子也能定量，但是这么多循环才有扩增，有可能是非特异的扩增了，还是想办法加大模板浓度吧。反转录的时候多加些RNA，可以取试剂盒推荐的RNA用量的上限。 从融解曲线来看，扩增还是比较特异的。你的特异的峰有高有低，是因为PCR产物还没达到饱和（从扩展曲线看，离平台期还远呢）。 综上，主要的问题，还是模板浓度过低。好在，扩增的特异性不错。  |
2楼2011-11-06 00:02:40
4楼2011-11-24 00:20:34
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2011-11-24 11:37:57