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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] 小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？

cDNA第一条链合成结束后，要做PCR扩目的基因片段，该如何做呢？和正常的DNA做PCR一样吗？哪位有详细点的步骤呀！
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1楼2011-11-01 16:47:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子，设计引物的时候留意下，别把引物弄到内含子上了。
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2楼2011-11-01 17:55:08
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:55:08:
和正常PCR一样就可以了。不过cDNA里面不包括内含子，设计引物的时候留意下，别把引物弄到内含子上了。

那请问下我PCR买的是Takara的，里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀？麻烦版主帮帮忙！
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3楼2011-11-02 22:01:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-11-03 10:53:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2011-11-02 22:01:34:
那请问下我PCR买的是Takara的，里面PCR的步骤与以前DNA的PCR步骤不是太一样呀？麻烦版主帮帮忙！

不知道你自己的PCR条件如何，但是你给的这个程序是很常规的程序啊，你觉得哪里可能不妥当？除了30个循环的步骤，可以在前面加个94℃/5 min预变性，最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间根据产物长度调整就可以了，一般Taq酶是1 min/kb。具体参照你的酶的说明书吧。
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4楼2011-11-02 22:19:08
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-02 22:19:08:
不知道你自己的PCR条件如何，但是你给的这个程序是很常规的程序啊，你觉得哪里可能不妥当？除了30个循环的步骤，可以在前面加个94℃/5 min预变性，最后加个72℃/5 min来延伸。其他没什么特别的了。
72℃延伸时间 ...

嗯，你说的我明白啦，谢谢啦，呵呵，好人开开心心呀1
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5楼2011-11-03 12:10:56
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晓风残月cl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用目的基因引物  反转录产物cDNA作为模板扩增  就是很普通的
我因为要做表达  最近也在做这些的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2011-11-06 18:15:11
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